《细胞工程制药复习》课件.pptVIP

医学PPT 单抗的特点 1.高度特异性 2.高度稳定性 3.高抗体活性 4.不可知性 5.过于单一性 单抗的制备原理 1.病毒转化 2.细胞杂交 单抗的制备过程 1.动物免疫与亲本选择 2.细胞融合 3.杂交瘤细胞的筛选 4.单抗制备和冻存 5.单抗纯化 1.动物免疫与亲本选择 1）骨髓瘤细胞 一般不分泌抗体 能在体外无限繁殖和连续继代培养 为HPRT－或TK－。 多用BALB/C 小鼠的骨髓瘤细胞。 2）淋巴细胞 免疫方法 体内法 体外法 2.细胞融合 脾细胞和骨髓细胞混匀 离心 沉淀滴加50%的PEG 0.5ml 静置90秒 滴加不含血清培液或BSS 5－10ml 静置10分钟 3.HAT培养基筛选杂交瘤细胞 细胞团块分散，加HAT溶液，稀释 加入有饲细胞的多孔培养板 2－3天半量换液，7天后完成 细胞融合的选择示意图 1）HAT选择系统 HAT：是含一定浓度次黄嘌呤（H）、氨基喋呤（A）及胸腺嘧啶核苷（T）的一种选择性培养基，其中三种成分与细胞DNA合成有关。 DNA合成途径有两种。 原理： 杂交瘤技术中，常选用次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶缺陷（HPRT-）或胸腺嘧啶核苷激酶缺陷型（TK-）骨髓瘤细胞为亲本之一，无补救途径。 含氨基喋呤培养基抑制了全合成途径。 淋巴细胞具有合成DNA的两条途径。 杂种细胞通过互补作用获得HRPT或TK基因，可应用培养基中次黄嘌呤及胸腺嘧