一种基于LFD-RMA技术检测新型冠状病毒的试剂盒及其检测方法发明专利.pdfVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 CN 112063761 A (43)申请公布日 2020.12.11 (21)申请号 202011091370.2 (22)申请日 2020.10.13 (71)申请人 济南国益生物科技有限公司 地址 250100 山东省济南市天桥区明湖西 路明湖广场3-2006 (72)发明人 陈大为　陈龙　李佳慧　张瑶　 孙玉凤　 (74)专利代理机构 济南信在专利代理事务所 (特殊普通合伙) 37271 代理人 黄波 (51)Int.Cl. C12Q 1/70 (2006.01) C12Q 1/6844 (2018.01) C12Q 1/6804 (2018.01) C12R 1/93 (2006.01) 权利要求书2页 说明书5页 附图2页 (54)发明名称 一种基于LFD-RMA技术检测新型冠状病毒的 试剂盒及其检测方法 (57)摘要 本申请属于试剂盒领域，具体为一种基于 LFD‑RMA技术检测新型冠状病毒的试剂盒，该试 剂盒包括上游引物、下游引物、探针、阳性标准 品、阴性标准品、酶混合物、测流层析检测试剂、 醋酸镁、缓冲液和产物稀释液。本发明的RMA结合 侧流层析技术检测新型冠状病毒的方法，既具有 分子生物学检测的高灵敏、高通量，又具有免疫 学检测的特异性好、操作简便的优点，还不需复 杂仪器，尤其适于基层实验室和检疫现场的新型 冠状病毒的快速筛查检测。 A 1 6 7 3 6 0 2 1 1 N C CN 112063761 A 权　利　要　求　书 1/2页 1.一种基于LFD-RMA技术检测新型冠状病毒的试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括上游 引物、下游引物和探针， 上游引物序列ORF1ab-F为： 5’-TACATTGGCGACCCTGCTCAATTACCTGCACCAC-3’； 下游引物序列ORF1ab-R为： 5’-[Biotin]AATTTCAGCAGGACAACGCCGACAAGTTCCGAGG-3’； 探针序列ORF1ab-P为： 5’-[FAM]CATTGCTAACTAAGGGCACACTAGAACCAGAAT[dSpacer]ATTTCAATTCAGTGT[C3- spacer]-3’。 2.如权利要求1所述的一种基于LFD-RMA技术检测新型冠状病毒的试剂盒，其特征在 于，所述试剂盒还包括：阳性标准品、阴性标准品、酶混合物、侧流层析检测试纸条、醋酸镁、 缓冲液和产物稀释液。 3.如权利要求2所述的一种基于LFD-RMA技术检测新型冠状病毒的试剂盒，其特征在 于，所述阳性标准品为新型冠状病毒的ORF1ab基因片段与pMD18-T载体相连接后得到的重 组质粒；所述阴性标准品为无菌双蒸水。 4.如权利要求3所述的一种基于LFD-RMA技术检测新型冠状病毒的试剂盒，其特征在 于，所述酶混合物包括大肠杆菌RecA蛋白、单链结合蛋白GP32、噬菌体UvsY蛋白、Bst聚合酶 和核酸外切酶III。 5.如权利要求4所述的一种基于LFD-RMA技术检测新型冠状病毒的试剂盒，其特征在 于，所述试剂盒的RMA扩增反应试剂的配比如下： 试剂 终浓度 Tris 50mM 醋酸镁 100mM 聚环氧乙烷