一种基于Y型探针组的等温指数扩增方法及其应用发明专利.pdfVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 CN 112359143 A (43)申请公布日 2021.02.12 (21)申请号 202011286888.1 (22)申请日 2020.11.17 (71)申请人 南方科技大学 地址 518055 广东省深圳市南山区西丽学 苑大道1088号 (72)发明人 蒋兴宇　王斗　王雪栋　 (74)专利代理机构 北京品源专利代理有限公司 11332 代理人 潘登 (51)Int.Cl. C12Q 1/70 (2006.01) C12Q 1/6844 (2018.01) G01N 33/543 (2006.01) 权利要求书2页 说明书7页 序列表1页 附图4页 (54)发明名称 一种基于Y型探针组的等温指数扩增方法及 其应用 (57)摘要 本发明提供一种基于Y型探针组的等温指数 扩增方法及其应用。所述等温指数扩增方法包括 如下步骤：将Y型探针组、靶标核酸、切刻内切酶 和聚合酶混合，所述Y型探针组的主探针和辅助 探针与靶标核酸互补配对后，引发所述切刻内切 酶和聚合酶辅助的等温链置换扩增反应，得到游 离的单链核酸，同时所述单链核酸作为引物继续 引发扩增反应，实现等温指数扩增。所述方法能 够快速、简单高效地扩增出目标核酸序列，且特 异性较高。将其用于检测新型冠状病毒时，能够 提高检测的效率和准确度。 A 3 4 1 9 5 3 2 1 1 N C CN 112359143 A 权　利　要　求　书 1/2页 1.一种基于Y型探针组的等温指数扩增方法，其特征在于，所述等温指数扩增方法包括 如下步骤： 将Y型探针组、靶标核酸、切刻内切酶、dNTPs和聚合酶混合，所述Y型探针组的主探针和 辅助探针与靶标核酸互补配对； 而后在所述切刻内切酶和聚合酶的作用下进行等温链置换扩增反应，得到游离的单链 核酸，同时所述单链核酸作为引物继续进行扩增反应，实现等温指数扩增。 2.根据权利要求1所述的等温指数扩增方法，其特征在于，所述Y型探针组的主探针与 辅助探针的3′末端互补配对的核苷酸个数为2～4个； 优选地，所述与辅助探针的3′末端互补配对的核苷酸为主探针自5′端起的第15～20个 核苷酸； 优选地，所述主探针的3′末端修饰有磷酸基团； 优选地，所述辅助探针扩增延伸后形成的长链上包括切刻内切酶的酶切位点。 3.如权利要求1或2所述的等温指数扩增方法在核酸扩增和/或核酸检测中的应用。 4.一种利用如权利要求1或2所述的等温指数扩增方法检测新型冠状病毒的试剂盒。 5.根据权利要求4所述的检测新型冠状病毒的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中包括 Y型探针组、切刻内切酶、聚合酶、dNTPs和纳米金核酸生物传感器； 优选地，所述Y型探针组的主探针和辅助探针的3′末端互补配对的核苷酸个数为4个； 优选地，所述Y型探针组的主探针上10～15nt的核苷酸与新型冠状病毒的核酸序列互 补配对，所述Y型探针组的辅助探针上10～15nt的核苷酸与新型冠状病毒的核酸序列互补 配对。 6.根据权利要求5所述的检测新型冠状病毒的试剂盒，其特征在于，所述Y型探针组的 主探针的核苷酸序列如SEQ  ID NO.1所示； 优选地，所述Y型探针组的辅助探针的核苷酸序列如SEQ  ID NO.2所示。 7.根据权利要求5或6所述的检测新型冠状病毒的试剂盒，其特征在于，所述纳米金核 酸生物传感器包括顺次相