膜蛋白抽提工具大比拼.PDFVIP

膜蛋白抽提工具大比拼 G 蛋白偶联受体（GPCR ）、整合素、离子通道蛋白……几乎所有的膜蛋白都是研究热点。当然， 那是因为它们太重要了。作为细胞结构与功能的关键成分，它们担当了很多重要角色。同时，这些蛋白 也是重要的药物靶点。然而，膜蛋白研究的道路上却布满了荆棘。无论是抽提、表达，还是后续的结晶、 三维结构分析，都让研究人员伤透脑筋。 膜蛋白通过许多疏水氨基酸残基锚定在膜结 组分分离开。第二步，利用抽提缓冲液 2A 或 2B 构里面，很难溶解在水性缓冲液系统中。为了制备 将膜蛋白从脂双层中抽提出。抽提缓冲液 2A 与 2B 膜蛋白样品，传统的方法是使用去污剂和表面活性 的区别在于主角不同，分别为 TM-PEK 试剂 A 和 剂增溶。但去污剂处理会使膜蛋白丧失其天然结 TM-PEK 试剂 B，不过 Novagen 并没有说明这两 构，因而又妨碍了膜蛋白的功能研究。 者的具体成分。抽提缓冲液 2A 非常温和，适于脆 弱的蛋白复合物。相比之下，2B 则更为高效，适 根据其明显的疏水性特点，人们常用“去污剂 用于那些难对付的跨膜蛋白，特别是有多个跨膜区 ＋机械处理” 的操作方法获取膜蛋白，用于增溶的 的顽固分子。哪怕是有 7 个跨膜区的 Frizzled-4 蛋 去污剂有离子型（如 SDS ）和非离子型的（如 白也能轻松搞定。你可以通过实验摸索，根据目的 Triton-X ）等。SDS 会使多数蛋白完全变性，限制 蛋白的特点和下游应用来二选一。 了很多下游分析。非离子型的去污剂较为温和，但 抽提膜蛋白（特别是有多个跨膜区的膜蛋白）的效 生物通 Tips ：如果是第一次使用 TM-PEK， 果往往很差。如果有一种有效的膜蛋白抽提方法， 当然两个试剂都要试。将同一个样品分成两份，进 既能保持膜蛋白的天然结构（或至少是活性结构）， 行平行试验。由于 2A 较温和，所以产率可能不及 又有较高的产量和纯度等优点，那将成为研究人员 2B 高，但对于活性分析等应用来说，则是更好的 的福音。 选择。对于大部分跨膜蛋白，TM-PEK 试剂 A 或 B 的2 倍稀释就已足够。但如果抽提效果不理想，你 陆陆续续，多个公司都推出了膜蛋白抽提试 2 也可以改变一下试剂 A 或 B 的浓度，从不稀释到 剂盒，至于它们的性能如何，有哪些特点，生物通 10 倍稀释，看看哪个的效果更好。 来为你一一解析。 与其他的膜蛋白抽提方法不同，TM-PEK 试剂 Novagen （MERCK） 盒不需要超声破碎、剧烈震荡、超速离心或高温孵 默克 Novagen 不久前推出的 ProteoExtract 育，这样，目的蛋白受损的几率就大大降低。 跨膜蛋白抽提试剂盒（简称为 TM-PEK ）是一种新 每个TM-PEK试剂盒足够处理 40 个样品，2A 颖的膜蛋白制备试剂盒。它是利用基于化学而非去 20 个，2B 20 个。每个样品约为 1-5×107 个细胞 污剂的方法来抽提