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膜片钳常见问题汇总 （刘新英-太昊）-膜片钳电生理群（122214545） 为了促进膜片钳技术交流，共同进步，本群最新上传了《膜片钳常见问题汇总》。希望能把膜片钳常见问题和解答都总结在一起。大家有问题或者问题的答案可以都写在上面，更新以后传上来，争取把这个文件做成人人必备的教科书，大家一起来写吧。 重要群文件： 《实用膜片钳技术》刘振伟 2013年12月9日 2015 《axon guide》2014年1月14日 《patch master 数据处理分析》2014年3月16日 《minianalysis》2014年3月26日 《P-97微电极拉制仪说明》2015年4月14日 《Pipette cookbook》2015年4月13日 《PClamp10数据分析记录软件使用手册》2015年10月20日 《Single channel recording》2015年10月26日 《WPI神经电生理-电极-接头》2015年7月13日 欧美找工作网站： /naturejobs/science/ /About-Neuroscience/Jobs/ 目录 TOC \o 1-3 \h \z \u 膜片钳标本的选择 4 转染外源性通道，研究通道的基本特性。* 4 研究某种特定细胞分泌活动或者电生理特性* 4 研究某种通道的生理功能。组织中某些细胞的功能，神经环路等。 4 研究某种通道或者细胞活动的生理功能，对动物行为的影响。 5 膜片钳系统 5 什么是膜片钳？Patch clamp 5 信号流 5 重要概念： 5 膜电位，静息电位，超极化，去极化，反转电位，命令电压： 5 参考电极 ： 7 记录电极： 7 电极参数： 7 电极参数对patch的影响： 7 怎样得到需要的电极参数？ 8 膜被动反应参数： 8 细胞外液的配置要注意什么？ 8 电极内液配置有什么要求？ 9 没有渗透压仪，怎么计算渗透压？ 9 封接时需要给正压吗？ 9 膜片钳放大器到底记录哪些参数？ 9 快电容与慢电容 10 Mode： 10 Membrane test测试脉冲怎样设置？ 11 电极入液后，测试脉冲变小或者消失是怎么回事？ 11 电极入液后，测试脉冲变的很大怎么回事？ 11 钳制电位是什么？如何设置？ 12 达不到G欧封接的原因 12 脑片细胞破膜困难怎么办？ 12 为什么破膜后慢电容总是补偿不好？ 12 为什么封接维持不了很长时间？ 12 什么是protocol? 什么是Ramp? 什么是step? 13 记录时发现Overload信号灯闪，为什么？ 13 解决噪音与基线问题的通用招数： 13 灌流时产生噪音怎么去除？ 13 基线怎么老是上下跳动？ 14 如何补偿液接电位？ 14 滤波频率，采样频率的应该如何设置？ 14 Whole-cell 问题及解答 14 是否每次一定要做电容消除、串连电阻补偿、漏减、和液接电位矫正？ 14 我准备做小鼠脑片膜片钳，但查到电极内液好多人用K-gluconate，但似乎又有人提到液接电位的事？直接用KCl代替K-gluconate可以吗？ 15 如何确定已经破膜？ 15 如何确定破膜是否充分？破膜不充分有什么影响？ 15 什么是尾电流，他主要反映通道的什么特性及用在那些方面？ 16 如何知道静息电位的数值？ 16 实验记录应该保留那些参数？ 16 记录到的电流幅度差异大怎么办？ 16 为什么我记录到的电流越来越小？ 16 什么是漏电流，为什么要做Leak subtraction？ 16 Cell-attached 记录问题及解答 17 Cell attached 可以记录全细胞电流或者电压吗？ 17 其他记录模式常见问题及解答 17 数据分析 17 如何分析突触放电活动数据？ 17 如何选用数码滤波类型？ 17 细胞类型 18 急性脑切片 18 急性脑切片的步骤： 18 要保证细胞活性需要注意什么问题？ 18 脑切片一般切多厚合适？ 18 如何判断脑片细胞的好坏？ 18 标准人工脑脊液配方与高渗蔗糖切片液 19 ACSF的配方中的Mg离子，有的用的MgSO4，有的用的MgCl2，他们有什么区别？ 19 常用内液配方 19 如何在脑片上记录AMPA受体电流和NMDA受体电流？ 20 培养脑切片 20 急性分离神经元 20 分离大鼠