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流式细胞术的设门方法 流式细胞术的设门方法 PAGE 流式细胞术的设门方法 流式细胞术数据分析目的就是需要确定所要研究的目的细胞器，这就涉及到设门。设门就是划定某一区域的细胞群体，对其单独加以分析或分选。门的形状可任意，方法有几种：（1）阈值设门。FSC（前向散射光）是最常用的阈值参数。FSC 和细胞的大小正相关。用FSC 设阈值，可以使低于该阈值的细胞碎片等其他杂质的信号不被处理。（2）散射光设门。以FSC 和SSC（侧向散射光）联合设门较常用。其最大优点是可以排除碎片或噪声的干扰。可以根据FSC vs SSC 散点图上不同细胞分布不同来设门目的细胞群。 另外还有荧光设门、反向设门和组合设门。流式细胞术的数据分析过程实际上就是选门和设门的过程。应该注意到设门是一个主观行为，是人为做出的决定，不同的人设门会存在很大差异，它是流式细胞术中最难掌握的技术。因此，对设门有2 点需要把握：首先，设门尽可能客观；其次，应该认识到设门需要主观决策。为了尽量减少主观判断带来的误差，最好分选一些细胞用显微镜观察来进一步确认门的客观性和准确性。 流式细胞术的设门的注意事项： 通过流式细胞术分析细胞样品时，欲获得更加准确的分析结果，应用最优化的设门策略非常重要。要考虑的因素包括： 1）排除细胞碎片 2）应用合适的荧光阴性对照 3) 排除死细胞. 4) 如果合适，使用一种共享标记物（比如CD45白细胞