全血胆碱酯酶活性的测定.pdfVIP

. 全血胆碱酯酶活性的测定 ——羟胺三氯化铁法 实验目的 1. 掌握三氯化铁比色法的实验原理、分析步骤及酶测定的临床意义。 2. 了解常见全血胆碱酯酶活性测定方法的优缺点、注意事项。 3. 学会末梢血的采集。 实验原理 血液胆碱酯酶使乙酰胆碱分解为胆碱和乙酸。 未被胆碱酯酶水解而剩余的乙 酰胆碱和碱性羟胺反应， 形成红色羌酸铁络合物。 颜色深度与剩余乙酰胆碱的量 成正比。在波长 520nm 比色定量，由水解的乙酰胆碱的量计算胆碱酯酶活性。 试剂和材料 蒸馏水 分光光度计 盐酸溶液 (1＋2) 10mL 比色管 碱性羟胺溶液 漏斗 磷酸盐缓冲液 (PH＝7.20) 恒温水浴箱，控温± 0.5℃ 三氯化铁溶液 采血针头 氯化乙酰胆碱标准液 血色素吸管 采样、运输和保存 用血色素吸管，取指血 20 μL，注入比色管中 (事先加入 0.98mL 磷酸盐缓冲液 ) ， 立即进行测定。 实验步骤 A 样品管 +0.98mL 磷酸盐缓冲液 +0.02mL全血 37℃水浴 5min +1.0mL 乙酰胆碱应用液 37℃水浴 30min B 对照管 0.98mL 磷酸盐缓冲液 +0.02mL 全血 37℃水浴 5min +1.0mL 水 37℃水浴 30min C 标准管 1.0mL 磷酸盐缓冲液 37℃水浴 5min + 1.0mL乙酰胆碱 应用液 37℃水浴 30min D 空白管 1.0mL 磷酸盐缓冲液 37℃水浴 5min +1.0mL水 37℃水浴 30min . . 水浴之后对 A、B、C、D 四个试管分别进行以下操作： 1.加入 4.0mL 碱性羟胺溶液，充分振摇 2min ； 2.加入 2.0mL 盐酸溶液，充分振摇 2min ； 3.加入 2.0mL 三氯化铁溶液，充分振摇； 4.滤纸过滤， 520nm 比色。 实验结果 表 1-1 520nm 波长下样品的吸光度 样品编号 A B C D 吸光度 0.299 0.003 0.538 0.000 结果计算 ①计算酶活性的绝对值 0.538 0.003 0.299 带入得： Xs= 7 =3.149 μmol 0.538 Xs：水解乙酰胆碱的浓度，μ mol(0.02mL ·37℃· 30min) ； A ： 试剂空白为参比的在波长 520nm 处样品管的吸光度值； 以 B：以试剂空白为参比的在波长 520nm 处对照管的吸光度值； C：以试剂空白为参比的在波长 520nm 处标准管的吸光度值。 ②计算酶活性的相对值 3.