实验项目二住骨髓间充质干细胞的倍增时间与生长曲线的测定.docxVIP

PMSCs生长曲线和倍增时间的测定 【1】 来自猪脂肪间充质干细胞的分离培养及其成脂分化： 取生长状况良好的 P1、P3、P5、P9代细胞，用0.25%胰酶消化液，在37 C消化1-3min , 制成单细胞悬液，然后以 5x104个/ml密度接种到30个直径为35mm培养皿中，随 机分成10组，每组3皿，每天检测一组中每皿的细胞总数，取 3个皿的均值，如此 至第10组结束，细胞技术如下（2004,司徒镇强）即一天消化3个组，共消化10天。 P1, P3,P5, P9均如此，每代 30个皿，共计120个皿。 培养时间Oiine of culture） （d） 细胞群体倍增时间（PDT） =（t-t°）|g2/（lgN t-IgNo） to培养起始时间，t,培养终止时间； No培养初始细胞数，Nt培养终止细胞数。 【2】 增强型绿色荧光蛋白转染猪骨髓间充质干细胞特性观察 用0.25%胰酶将转染后的细胞克隆消化为单个细胞，用 PBS洗2遍，1x105个细胞加 入75卩I破膜剂，振荡10s加入PI染料700卩I,室温避光30min,上机检测；选同期培养的为 转染细胞为对照组，比较 EGFP转染对细胞增殖的影响，分别计算出静止期 G0/G1，增殖期 S%,和 G2/M 【3】 两种方法分离小型猪骨髓间充质干细胞的比较 分别取两组0,1,3代细胞，制成1x103的细胞悬液，接种到 96孔板，每