实验核酸的提取.pptVIP

Company Logo 文章如果有不当或者不妥的地方，请您联系我修改文章或者删除文章，文章来源于网络收集，如果有侵权的问题，请联系我沟通协调改正，非常感谢您！ Company LOGO 试验核酸 提取 Company Logo 一、试验原理 核酸是生物体最关键 组成成份之一。动物组织细胞中 核糖核酸（RNA）与脱氧核糖核酸（ DNA）大部分与蛋白质结合, 以核蛋白 形式存在。所以分离核酸时必需使核酸与蛋白质分离, 并除去蛋白质。 本试验是将组织匀浆后加水饱和酚溶液, 振荡使蛋白质变性, 变性蛋白质溶于酚相或两界面处形成凝胶层。而DNA或RNA则溶于上层 水盐溶液中。在离心后上层 水盐溶液中加入乙醇, 核酸不溶于乙醇而形成白色絮状沉淀析出。 DNA与 RNA均由单核苷酸组成, 每个单核苷酸中含有磷酸、嘌呤与嘧啶、戊糖（核糖、脱氧核糖)。核酸用硫酸水解后, 即可游离出这三种物质。用下述方法可分别判定出这三类物质。 Company Logo （1）磷酸: 用钼酸铵与之作用可生成磷钼酸, 磷钼酸可被氨基萘酚磺酸还原成蓝色钼蓝 （2）嘌呤碱: 用硝酸银与之反应生成灰褐色 絮状嘌呤银化合物。 （3）戊糖: A.核糖:用硫酸使之生成糠醛, 糠醛与3, 5－二羟甲苯综合成为一个绿色化合物 B.脱氧核糖: 在硫酸作用下, 与二苯胺生成蓝色化合物 Company Logo 二、试剂及器材 钼酸铵试剂 氨基萘酚磺酸 3, 5－二羟甲苯溶液 二苯胺试剂 0.9%NaCl 20％三氯醋酸 水饱和酚 预冷 95％乙醇 浓硫酸 5%硝酸银 5%硫酸 Company Logo 试验步骤一: 动物组织中核酸 提取 1. 匀浆制备: 全班制备一份。取冻存兔肝20g置匀浆器中, 加入0.9%NaCl溶液60ml制成匀浆。 2. 提取: 将匀浆取出分装在四个100ml塑料离心管内, 分别加入1mol/L NaCl溶液15ml, 混匀, 再加入水饱和酚溶液40ml, 猛烈振荡10min, 然后4000rpm离心20min。 将上清轻轻吸入一烧杯中, 每2人一组取上清液4ml于小离心管中, 加入等量 预冷 95%乙醇, 即可见白色沉淀逐步析出, 静置10min后, 3500rpm离心10min, 倾去上清, 即得白色 核酸钠沉淀。 Company Logo 试验步骤二、核酸 水解 在含有核酸钠盐 离心管内加入5%硫酸4ml, 用玻璃棒混匀, 转入小试管中, 在沸水浴中加热15min。 Company Logo 试验步骤三、DNA与RNA成份判定 （1）嘌呤碱 判定: 试管号 水解液 5%硫酸 浓氨水 5%硝酸银 1 2 20滴 —— —— 20滴 数滴呈碱性 数滴呈碱性 10滴 10滴 加入硝酸银后, 观察有什么改变？静止15min后再比较两管中沉淀颜色有何改变？ Company Logo （2）磷酸 判定 管号 水解液 5%硫酸 钼酸铵试剂 氨基萘酚磺酸 1 2 10滴 —— —— 10滴 5滴 5滴 20滴 20滴 沸水浴中加热数分钟, 观察两管颜色改变。 Company Logo 文章如果有不当或者不妥的地方，请您联系我修改文章或者删除文章，文章来源于网络收集，如果有侵权的问题，请联系我沟通协调改正，非常感谢您！