人冠状病毒核酸多重检测试剂盒发明专利.docxVIP

人冠状病毒核酸多重检测试剂盒 技术领域 本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明涉及一种用于检测七种人感染冠状病毒核酸的检测试剂盒。 背景技术 2019-nCoV属于冠状病毒科β冠状病毒属，与严重急性呼吸综合征相关冠状病毒(SARS-CoV)和中东呼吸综合征相关冠状病毒(MERS-CoV)近缘,都会导致严重的肺炎症状。该病毒经飞沫，接触等途径传播，潜伏期3-7天，最长可达14天，潜伏期患者即具备较强传播性。截至目前，累计已确诊病例达到两千多万。目前数据表明，2019-nCoV比SARS-CoV毒力弱，但传播力强；造成其能够跨物种传播的受体可能与SARS-CoV一致，都是血管紧张素转化酶Ⅱ(ACE2)。此次疾病暴发后，科技人员投入大量精力开展研究，快速开发出诊断试剂，初步确定病原特性， 筛选出可能抑制该病毒的临床药物，也在加快疫苗的研发进程。 2019-nCoV的出现再次提醒人们建立系统的冠状病毒监测网络的重要性。 新型冠状病毒2019-nCoV是继SARS-CoV和MERS-CoV后从野生宿主跨越种系感染人类的第3种可引起严重肺炎表现的冠状病毒，也是人类感染的第7种冠状病毒，此前还包括NL63/229E/OC43/HKU1这4种冠状病毒，这4种在人群中较为常见，致病性较低，一般仅引起类似普通感冒的轻微呼吸道症状。 冠状病毒引起的人类疾病主要是呼吸系统感染。该病毒对温度敏感，通常在冬季和早春季节流行。新型冠状病毒引发的肺炎就是由上呼吸道病毒感染、向下蔓延所致的肺部炎症。感染冠状病毒一般会引起以下症状：打喷嚏；流鼻水；疲劳；咳嗽；极少情况会发烧、喉咙痛、加重哮喘。 由于冠状病毒均会引起呼吸道感染，且感染途径、前期感染症状都较为相似，但不同类型的冠状病毒毒性和传染能力大不相同。目前还没有能够建立系统高效、便捷快速的对整个冠状病毒网络进行检测的方法。因此有必要开发一种能使用较少的样本、同时对7种冠状病毒进行全面系统检测的方法，来满足临床需要。 发明内容 本发明的目的在于提供一种高效、系统、便捷快速、灵敏度高的多重人类冠状病毒检测试剂盒，从而大大节省时间、试剂和经费，用有限的样本为临床提供更多准确的诊断信息。 本发明的第一方面，提供了一种用于多重检测冠状病毒核酸的PCR 引物对组，所述引物对组包括： 第一引物对(特异性检测新型冠状病毒2019-nCoV)，所述第一引物对包括如SEQID NO.:1所示的正向引物；和，如SEQ ID NO.:2所示的反向引物。 在另一优选例中，所述引物对组还包括： 第二引物对(特异性检测SARS-CoV)，所述第二引物对包括如SEQ ID NO.:3所示的正向引物；和，如SEQ ID NO.:4所示的反向引物；和/或 第三引物对(特异性检测MERS-CoV)，所述第三引物对包括如SEQ ID NO.:5所示的正向引物；和，如SEQ ID NO.:6所示的反向引物；和/或 第四引物对(特异性检测冠状病毒OC43)，所述第四引物对包括如 SEQ ID NO.:7所示的正向引物；和，如SEQ ID NO.:8所示的反向引物；和/或 第五引物对(特异性检测冠状病毒229E)，所述第五引物对包括如 SEQ ID NO.:9所示的正向引物；和，如SEQ ID NO.:10所示的反向引物；和/或 第六引物对(特异性检测冠状病毒NL63)，所述第六引物对包括如 SEQ ID NO.:11所示的正向引物；和，如SEQ ID NO.:12所示的反向引物；和/或 第七引物对(特异性检测冠状病毒HKU1)，所述第七引物对包括如 SEQ ID NO.:13所示的正向引物；和，如SEQ ID NO.:14所示的反向引物。 在另一优选例中，所述引物对组还包括： 第八引物对(内标引物对)，所述第八引物对包括如SEQ ID NO.:15 所示的正向引物；和，如SEQ ID NO.:16所示的反向引物。 本发明的第二方面，提供了一种用于多重检测冠状病毒核酸的引物探针混合液，所述引物探针混合液包括本发明第一方面所述的PCR引物对组和选自下组的一个或多个探针： 第一探针：特异性靶向新型冠状病毒2019-nCoV目标序列； 第二探针：特异性靶向SARS-CoV目标序列； 第三探针：特异性靶向MERS-CoV目标序列； 第四探针：特异性靶向冠状病毒OC43目标序列； 第五探针：特异性靶向冠状病毒229E目标序列； 第六探针：特异性靶向冠状病毒NL63目标序列； 第七探针：特异性靶向冠状病毒HKU1目标序列；和 第八探针：特异性靶向内标目标序列。 在另一优选例中，所述引物探针混合液包括选自下组的一个或多个探针： 如SEQ ID NO.:17所示的第一探针； 如SEQ ID NO.:18所示的第二探针； 如SEQ ID NO.:19所示的第三探针； 如