miRNA及其发展和应用.pptxVIP

miRNA及其研究(yánjiū)和应用 谢东君(dōnɡ jūn)2015202030079 第一页，共22页。RNA在生命过程(guòchéng)中的作用mRNA——合成(héchéng)蛋白质的蓝图rRNA——合成(héchéng)蛋白质的工厂tRNA——合成(héchéng)蛋白质的搬运工miRNA——？？？第二页，共22页。被关注(guānzhù)的RNA研究2000年，RNAi的研究(yánjiū)进展被Science杂志评为重大科技突破。2001年，RNAi作为当年最重要的科学研究(yánjiū)成果之一，再次入选“十大科技突破”。2002年12月20日，Science杂志将“Small RNA RNAi”评为2002年度最耀眼的明星。同时，Nature杂志亦将Small RNA评为年度重大科技成果之一。2003年，microRNA的研究(yánjiū)第四次入选“十大科技突破”。2005年，microRNA的研究(yánjiū)第五次入选“十大科技突破”。2006年，RNAi获得当年的诺贝尔生理学或医学奖。并且microRNA的研究(yánjiū)第六次入选“十大科技突破”。RNA研究(yánjiū)的突破性进展，是生物医学研究(yánjiū)领域近20年来，可与HGP相提并论的最重大成果之一。第三页，共22页。什么(shén me)是miRNA第四页，共22页。miRNA的发现(fāxiàn)第五页，共22页。miRNA的产生(chǎnshēng)过程第六页，共22页。miRNA的作用(zuòyòng)机制第七页，共22页。miRNA的特点(tèdiǎn)与其他寡核苷酸相比,主要有三点不同:没有开放阅读框架及蛋白质编码基因(jīyīn)的特点通常的长度约为22个核苷酸,但在3’端可以有几个碱基的长度变化成熟的miRNA5’端有一磷酸基团,3’端为羟基第八页，共22页。miRNA的生物学功能(gōngnéng)第九页，共22页。miRNA的保守(bǎoshǒu)性第十页，共22页。miRNA 靶基因(jīyīn)的寻找 尽管数百种miRNA在最近几年中被发现了,但是只有非常少量的miRNA被确定其作用,许多其他的miRNA基因(jīyīn)的作用还没有被阐明。因此发现miRNA的作用靶点成为了解其在不同的生理过程中的功能的关键。目前主要利用生物信息学方法和生物学实验方法寻找 miRNA 的靶基因(jīyīn)。第十一页，共22页。生物信息学方法寻找(xúnzhǎo)miRNA 靶基因生物信息学方法主要是利用某种算法对靶基因样本进行评分及筛选。主要遵循以下几个常用原则: miRNA 与其靶位点的互补性miRNA 靶位点在不同物种之间的保守(bǎoshǒu)性miRNA-mRNA 双链之间的热稳定性miRNA 靶位点处不应有复 杂二级结构miRNA 5′端与靶基因的结合能力强于 3′端常用的算法有： miRanda、TargetScan、RNAhybrid、PicTar、miTarget等第十二页，共22页。第十三页，共22页。生物学实验方法寻找(xúnzhǎo)miRNA 靶基因由于计算机模拟在预测 miRNA 靶基因时存在一定的局限性, 因此很多学者也希望能够利用生物学实验方法直观(zhíguān)地寻找 miRNA 靶基因。一般可以从两个水平去寻找miRNA靶基因从 mRNA 水平寻找 miRNA 靶基因 从蛋白质水平寻找 miRNA 靶基因 第十四页，共22页。从 mRNA 水平(shuǐpíng)寻找 miRNA 靶基因——基因芯片法将 miRNA 成熟体双链或腺病毒载体转染至细胞中, 使得 miRNA 在细胞中过表达, 之后利用基因芯片分析 mRNA的变化(biànhuà)以找出相应 miRNA 的靶基因。由于miRNA在体内通过翻译抑制或影响 mRNA的稳定性起作用, 因此这种方法在寻找起翻译抑制作用的miRNA 的靶基因时存在一定困难. 第十五页，共22页。从 mRNA 水平寻找 miRNA 靶基因(jīyīn)——免疫共沉淀法利用 AGO 蛋白家族既能结合 miRNA 又能结合 mRNA 的特性, 分别使用AGO-1 和 AGO-2 蛋白的单克隆抗体在人类细胞中进行免疫共沉淀, 得到与 AGO-1 和 AGO-2 蛋白结合的mRNA 各 600 条, 并通过克隆测序对这些 mRNA 进行鉴定. 同时从与 AGO-1 蛋白结合的 mRNA 中随机挑选(tiāoxuǎn) 6 条进行荧光素酶报告基因检测, 发现其中有 5条都是 miRNA 的靶基因. 第十六页，共22页。从蛋白质水平寻找 miRNA 靶基因(jīyīn)——细胞培养稳定同位素标记技术分别将成熟(chéngshú)