分子杂交技术hu.pptVIP

6.5.3 抑制性扣除杂交（SSH） 该方法运用了杂交二级动力学原理，即丰度高的单链cDNA在退火时产生同源杂交速度快于丰度低的单链cDNA，从而使原来在丰度上有差别的单链cDNA相对含量达到基本一致。 所谓抑制PCR，则是利用链内退火优先于链间退火，从而使非目的序列片段两端反向重复序列在退火时产生类似发卡的互补结构，无法与引物配对，从而选择性地抑制了非目的基因片段的扩增。 第九十五页，共129页 第九十六页，共129页 SSH自从在克隆基因的实验中采用以来，其优势是非常明显： （1）极大降低了假阳性率，SSH方法采用两次扣除杂交和两次PCR，保证了该方法具有较高特异性。据有关报道证明SSH方法假阳性率可降至6%; （2）高度灵敏性，由于在反应中将丰度不同的单链分子含量归一化，保证了低丰度mRNA检测成功; （3） SSH法在一次反应中，可同时分离出上百个差异表达的基因，这一点远胜于DDRT-PCR和RAD。 第九十七页，共129页 第七节 原位杂交 7.1 原位核酸分子杂交技术的发展 7.2 原位分子杂交技术的基本方法 7.3 RNA原位核酸杂交 7.4 双重原位杂交方法 7.5 原位杂交的PCR增敏法 7.6 原位杂交的CSA增敏法 第九十八页，共129页 原位核酸分子杂交技术简称原位杂交(in situ hybridization ISH)是应用已知