分子杂交及基因芯片技术.pptVIP

第一页，共38页 4.1 Southern Blotting 1977年， Southern发明了一种检测DNA分子的方法，将琼脂糖凝胶电泳上的DNA片段转移到硝酸纤维素滤膜上，再进行同源杂交，寻找有同源性的DNA分子。 杂交过程 Southern 印记转移 分子杂交 Edwin Southern 第二页，共38页 Southern 印记转移 目的DNA琼脂糖凝胶电泳 0.4 mol/L NaOH 变性成单链 1.5 M NaCl、1M Tris（pH7.4）中和，保持单链 通过毛细管渗吸、电转移、真空等方法 转移至硝酸纤维素膜或者尼龙膜 紫外线照射固定DNA 第三页，共38页 转移 buffer：6×SSC (or SSPE) 时间: 1kb 1hr, 15kb 18hr 一般情况２－３hr 滤纸 凝胶 滤膜 吸水纸 玻璃板 重物 支持物 500g 第四页，共38页 预杂交滤膜,掩盖滤膜上非特异性位点 变性鱼精DNA；3-12小时 让探针与同源DNA片段杂交,然后漂洗除去非特异性结合的探针 混合滤膜、探针、杂交液； 6-12小时 通过显影检查目的DNA所在的位置 X光片上曝光; 1-2天 杂交 第五页，共38页 第六页，共38页 探针 是一段核酸片段，对它进行标记以后，可以通过分杂交来探测核酸样品中与之同源的ＤＮＡ片段。