基因工程-克隆载体09课件.pptxVIP

基因工程载体与受体细胞 ;载体的概念 载体应具有的特性 载体的类型; 目的外源基因分离后，是无法自主进入到宿主细胞并进行复制表达的，必须有一个运载工具将其运达宿主细胞，才能达到复制、扩增和表达的目的;载体应具有的特性 ;; 在宿主细胞中具有尽可能多的拷贝数，以利外源基因扩增 在质粒非必需区有供外源基因插入的多克隆位点（multiple cloning sites, MCS） 具有一定的容纳外源基因的幅度，即容量 具有合适的选择标记 ; 载体的分子量要小：降低对转化率的影响；利于容纳较大的外源基因；拷贝高；易于分离；减少了不必要酶切位点 在细胞中稳定性高 易于从宿主细胞中分离、纯化和鉴定 质粒本身必须是安全的 最好具有广泛的宿主适应性、核酸序列背景清楚 ; 按其来源和本质可分为以下7种： 质粒载体(plasmid) 噬菌体载体 COS质粒（cosmid）。也叫粘粒载体。是质粒与λ的组合 噬菌粒载体（phagemid）是质粒与f1的组合 病毒载体　DNA病毒为主 人工染色体载体 穿梭载体（shuttle）; 按功能区分： 克隆载体：也叫转移载体，只起转运，扩增作用　　 表达载体：带有表达功能，即有启动子，可转录和/或翻译 测序载体：只产生单链DNA用于测序，如M13、T载体、U载体 转录及调控载体;