分离技术概论吸附分离.pptVIP

选择性强弱次序反映所需洗脱力的大小 在离子交换色谱过程中的仅靠离子的亲和力作用来洗脱分离金属离子的范围十分有限，一般需通过络合配位体与金属离子部分配位螯合使交换平衡发生移动。 通常采用乙二胺阳离子和酒石酸盐，或羟基丁二酸盐阴离子等络合淋洗剂来实现金属离子的洗脱。 第三十页，共67页 离子对色谱 对强酸或强碱类完全解离的离子或可离子化的进料，没有足够的保留值，不能获得良好的分离。 离子对色谱是通过在流动相中加入合适的、与进料离子相反电荷的离子，使其与进料离子缔合成中性离子对化合物，以增大其保留值而达到良好分离效果的一种技术。 离子对色谱也可分成正相离子对色谱和反相离子对色谱。 正相离子对色谱是将离子对试剂涂渍于硅胶或纤维素上，当用非极性溶剂为流动相时，离子对试剂易于流失； 反相离子对色谱采用烷基键合相为固定相，流动相是含有低浓度反离子的水、有机溶剂缓冲溶液，离子对试剂不易流失，使用方便，适用面广。 第三十一页，共67页 反相离子对色谱的固定相 原则上烷剂键合相都可用作反相离子对色谱的固定相； 常用的固定相为C8和C18烷基，如季胺（四甲胺、四丁胺和十六烷基三甲胺离子等）、叔胺（三辛胺）、烷基磺酸盐（甲基和庚基磺酸盐）、高氯酸、烷基硫酸盐等。 短链烷基键合相的稳定性较差。 第三十二页，共67页 常用流动相 甲醇/水溶液对于许多离子对试剂均有良好的溶解度,常作为流动相； 乙腈对离子对试剂的溶解度较低，要使进料完全溶解，流动相的pH值要适当，以获得最大的保留值。 第三十三页，共67页 凝胶色谱 基于溶质分子的大小及其在色谱柱内的迁移速率差异来达到分离的一种新技术。 也称排阻色谱（Exclusion chromatography）或凝胶渗透色谱（Gel permeation chromatography）, 与其它色谱不同，不是基于固定相的比表面积和进料分子的相互作用机理，也不是以分子的键合或吸附作用。 第三十四页，共67页 组分在凝胶内的扩散速度 凝胶类似于具有较大孔径的分子筛，是一种不带电荷的具有三维空间的多孔网状结构。 当含有大小不同的溶质分子混合物随流动相流经以凝胶颗粒为固定相的色谱床层时，混合物中各组分按其分子的大小不同而被凝胶阻拦。 分子量较小的组分可以进入凝胶网孔，而大分子被阻在凝胶颗粒外，可随洗脱液延凝胶颗粒间的空隙迁移，速度较快，只需要少量的时间就能将其冲洗出； 小分子进入凝胶后，随着洗脱过程的进行，会从凝胶网孔中缓慢扩散出来，需要较长的冲洗时间。 第三十五页，共67页 凝胶的分类 制备原料：有机凝胶、无机凝胶； 机械性能：软性凝胶、半硬性凝胶、硬性凝胶； 软性凝胶的交联度低，溶胀性大、不耐压； 硬性凝胶的机械强度好，如多孔玻璃和硅胶等； 半硬性凝胶为最常用的：有交联聚苯乙烯、交联聚乙酸乙烯酯、交联葡聚糖、交联聚丙烯酰胺、琼脂糖等种类。 对溶剂的适应性：亲水、亲油、两性凝胶。 亲水性凝胶主要应用于蛋白质、核酸、酶、多糖等生物大分子的脱盐与分离提纯； 亲油性凝胶多用于不同相对分子质量的高聚物分离。 第三十六页，共67页 凝胶分离三个重要的性能指标 凝胶的分离范围、渗透极限、固流相比 分离范围： 指分子量淋出体积标定曲线的线性部分，相当于1～3个数量级的分子量； 渗透极限： 表示可分离分子量的最大极限，超过此极限的大分子均会在凝胶间隙中流走，没有分离效果； 固流相比： 为色谱柱内所有可渗透的孔内容积与凝胶粒间隙体积之比，固流相比越大，分离容量越大。 第三十七页，共67页 亲和（膜）色谱 是利用偶联于载体上的亲和配基对特定大分子的亲和作用达到大分子的分离和纯化的： 有范德华力、静电力、氢键和疏水作用四种非共价键合的相互作用力存在，这些作用可能以单独或同时存在于亲和识别和结合过程中。 在载体上的配基与混合物中的配体之间的空间位置的合理配合，配基与配体之间的相互作用。 具有实用意义的有亲和色谱包含亲和（载体）色谱和亲和膜色谱两种型式。 第三十八页，共67页 特异性配基和通用性配基亲和色谱 亲和色谱对特定的生物大分子具有亲和作用，能选择性地分离或纯化生物大分子。 特异性配基亲和色谱（Biospecific ligand affinity chromatography） 通用性配基亲和色谱（Pseudobiospecific ligand affinity chromatography ）， 前者连接的配基为复杂的生物大分子（如抗原、抗体等），后者的配基为简单的生物分子（如氨基酸等）或非生物分子（如过渡金属离子和某些染料分子）。 第三十九页，共67页 配基的种类 生物特异性配基 是指利用自然界中特异性相互作用生物物质对之一做配基，如酶-底物、酶-抑制剂、激素-互补接受体、