分析化学第十章色谱法.pptVIP

高效：采用微米级的、粒度均匀的固定相，传质阻力小，柱效高塔板数达到103-104 数量级 高压:固定相细，对流动相的渗透能力差， 需用高压泵驱动,柱压150大气压 高速:流动相线速快，1 mL/min，分析速度快，几十分钟完成一次分离分析 高灵敏度:配置高灵敏度检测器，在线检测，分析灵敏度高，检测下限可达10-9-10-11g 上述四大特点相互关联 第九十二页，共136页 高效液相色谱的应用 HPLC几乎可以分离分析除永久气体之外的所有化合物，在实际应用中主要应用于分离分析分子量较大，沸点较高的各类小分子及离子型化合物，还可以用于分离及分析合成高分子和生物高分子化合物。目前HPLC主要应用于制药、食品、医学、生物、化工、环境等领域。 HPLC 分离四种生物碱色谱图 色谱柱：Venusil XBP C8 (4.6×250mm，5μm，100?)流动相：（20mM KH2PO4，pH3.0）：乙腈=90：10（v/v）流速：1.0mL/min。柱温：27℃。进样体积：2μL。检测波长：254nm 第九十三页，共136页 10.4.1 影响HPLC分离的主要因素 柱效 不同粒径固定相的HPLC范氏曲线图 HPLC的Van Deemter 方程: 从左下图的可见： 范氏曲线中无最低点，是因为HPLC中分子扩散项可以忽略，因此HPLC的范方程可写为： 固定相颗粒的直径对HPLC柱 效产生极大的影响 小颗粒固定相不仅有利于提高柱效，同时还有利于实现高速分离。如，在最近发展起来的超高压液相色谱中（UPLC）：粒径减小到1.7um, 而柱效可达到100 ,000 到 300,000 塔板。 依然用色谱分析方程 来讨论 第九十四页，共136页 选择性因子α 选择性因子α对相邻组份的分离度起十分关键的作用，α越大越有利于分离。在HPLC中，流动相的组成会显著影响组份在两相间的分配系数，进而影响两组份的选择性因子，而且调整流动相的组成比较方便，因此改变流动相组成是改变α的最重要手段。 容量因子k 目标组份分配比k应该控制在2～10之间。在HPLC中，可以通过改变流动相的组成和固定相种类改变目标组份的分配比。HPLC柱的温度对分配比的影响较小，多数情况下，HPLC的色谱柱处于室温状态。 第九十五页，共136页 10.4.2 HPLC仪器 HPLC 由 输液系统，进样系统，分离系统，检测系统，数据处理及控制系统 构成 HPLC仪器流程图 第九十六页，共136页 HPLC的主要关键部件之一，操作压力：150～350×105 Pa。要求具有压力平稳、脉冲小、流量稳定可调、耐腐蚀等特性。主要包括串联式及并联式柱塞往复泵。 高压泵 1. 输液系统 第九十七页，共136页 梯度洗脱系统 等度模式（a）和梯度模式（b）HPLC分离卤代芳香族化合物的色谱图 现代HPLC系统通常具有多个流动相通道，每个流动相通道都配备一个储液瓶，这样可以实现多组份流动相的自动配制和梯度洗脱（gradient elution）。梯度洗脱是HPLC的一种流动相工作模式，指的是在HPLC分离过程中，由两种或两种以上的溶剂构成的混合流动相中，各种溶剂的比例随时间的变化而有规律地变化。 第九十八页，共136页 梯度淋洗装置 外梯度: 利用两台高压输液泵，将两种不同极性的溶剂按一定的比例送入梯度混合室，混合后进入色谱柱。 内梯度: 一台高压泵, 通过比例调节阀,将两种或多种不同极性的溶剂按一定的比例抽入高压泵中混合。 第九十九页，共136页 高分子小球 (苯乙烯及衍生物与二乙烯苯聚合) 既可用于气液色谱的载体，又可用作于气固色谱分析。广泛用于各类样品的分析。 聚四氟乙烯载体：用于分离强腐蚀性和强极性化合物。 玻璃微球：低液载比，能在较低温度下分离沸点较高的化合物。 ②非硅藻土载体 第六十页，共136页 基本要求 对组分有良好的选择性 ：使样品中各组分能彼此分离 液态且蒸气压低 ：减少色谱柱固定液的流失 热稳定性：保证性能 化学惰性好 ：不与组分、载体、载气发生不可逆的化学反应 固定液与组份间的作用力 定向力：极性分子之间永久偶极矩之间的作用力 诱导力：极性分子与易极化的非极性分子之间作用力 色散力：非极性分子之间作用力 氢键力：易生成氢键的分子之间作用力 (2) 固定液 第六十一页，共136页 固定液的相对极性 相对极性值的测定： 选 3 根柱子： 待测柱 强极性柱：β,β’氧二丙腈为固定液 非极性柱：角鲨烷为固定液 选两个评价物： 苯和环己烷，测定它们在每根柱上的相