分析化学紫外可见分光光度法.pptVIP

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * Varian Cary 100 UV-Visible Spectrophotometer 第九十四页，共106页 (二) 分光光度计的类型与光学性能 (1) 单光束分光光度计 (2) 双光束分光光度计 1、分光光度计的类型 第九十五页，共106页 单光束分光光度计 第九十六页，共106页 双光束分光光度计 第九十七页，共106页 第九十八页，共106页 波长范围 波长准确度 波长重现性 吸光度(透光率)测量范围 光度准确度 光度重复性 分辨率 杂散光 2、分光光度计的光学性能 第九十九页，共106页 第一百页，共106页 3、分光光度计的校正 (1) 波长校正 (2) 吸光度校正 (3) 吸收池校正 第一百零一页，共106页 紫外可见分光光度计的发展趋势 小型化 智能化 在线化 网络化 第一百零二页，共106页 美国海洋光学的光纤光谱仪(USB-4000型) 第一百零三页，共106页 什么是比色法？ 对于能吸收可见光的有色溶液的测定方法。 许多不吸收可见光的无色物质可以用显色反应变成有色物质，使之能用比色法测定。 也称为可见分光光度法。 第一百零四页，共106页 显色反应的条件 1、被测物质与所生成的有色物质之间，必须有确定的定量关系。 2、反应产物必须有足够的稳定性。 3、显色剂在测定波长处无明显吸收。 4、反应产物的摩尔吸收系数足够大(103～105)，以保证灵敏度。 5、显色反应须有较好的选择性，才能减免干扰因素。 第一百零五页，共106页 影响因素 1.试剂与溶剂 2.酸碱度 3.时间 4.温度及其它 第一百零六页，共106页 * * * * * * * * * * * * * * * * * * * (二) 光学因素 非单色光 为了保证透过光的强度对检测器有明显的响应，狭缝就必须有一定的宽度，这就使分离出来的光，同时包含了所需波长的光和附近波长的光，即是具有一定波长范围的光。这一宽度称为谱带宽度。 是采用峰值测定的原因。 第六十二页，共106页 杂散光 从分光器得到的单色光中，还有一些不在谱带宽度范围内的与所需波长相隔较远的光，称为杂散光(stray light)。 是不用末端吸收的原因。 第六十三页，共106页 散射光和反射光 吸光质点对入射光有散射作用，入射光在吸收池内外界面之间通过时又有反射作用。散射光和反射光，都是入射光谱带宽度内的光，对透射光强度有直接影响。 是空白对比补偿的原因。 第六十四页，共106页 非平行光 通过吸收池的光，一般都不是真正的平行光，倾斜光通过吸收池的实际光程将比垂直照射的平行光的光程长。 这种测量时实际厚度的变异也是同一物质用不同仪器测定吸光系数时，产生差异的主要原因之一。 第六十五页，共106页 (三) 透光率测量误差 第六十六页，共106页 1、暗噪音(dark noise) 暗噪音是光电检测器或热检测器与放大电路等各部件的不确定性引起的，与光讯号无关，可视为一个常量。其在A为0.2～0.7范围内，造成相对误差较小，为测量最适宜范围。(图10-11) 第六十七页，共106页 有一化合物在醇溶液中的?max为240nm, 其?为1.7?104 ，分子量为314.47。试问配制什么样浓度(g/100ml)测定含量最为合适。 (3.70×10-4～1.29×10-3) 第六十八页，共106页 2、讯号噪音 讯号噪音亦称讯号散粒噪音。光敏元件受光照射时的电子迁移，每一单位时间中电子迁移数量是不相等的，而是在某一均值周围的随机数，形成测量光强时的不确定性。随机数变动的幅度随光照增强而增大，与光的波长及光敏元件的品质有关。 第六十九页，共106页 How UV-Vis is applied in quantitative analysis? How UV-Vis is applied in qualitative analysis? UV Spectrophotometer 第七十页，共106页 一、定性鉴别 第七十一页，共106页 （一）对比吸收光谱特征数据 1.吸收峰 2.谷 3.肩峰 4.末端吸收 第七十二页，共106页 第七十三页，共106页 (二) 对比吸光度(吸光系数)的比值 第七十四页，共106页 举例：UV-Vis法鉴别VB12注射液 第七十五页，共106页 361nm 550nm 278nm 【鉴别】 取含量测定项下的溶液、照紫外可见光光度法（附