生物化学课件：第十章 RNA的生物合成.pptVIP

本章的要求 10.1 转录的概念和特点 10.2 原核生物转录的过程 10.3 转录后的加工 10.1.转 录 概 述 （1）转录特点 转录是不对称的 有两方面的含义： 一 是DNA分子上一股可转录，另一股不转录； 二 是模板链并非永远在同一单链上。 （2）转录的其他特点 用以转录的单链DNA，称为模板链, 与复制不同，转录是局部的，从启动子开始到终止子结束，为一个转录单位; 转录的忠实性相对弱； 转录不需要引物； 转录首先得到RNA前体，然后再进行加工转变为成熟的RNA. 转录的忠实性相对弱；为什么？ RNA聚合酶只有 5’→3’的聚合酶活性，无5’-外切酶或3’-外切酶的活性。RNA聚合酶缺乏 3’-外切酶的活性是转录忠实性不如复制的主要原因； （3）转录的条件 (1)模板：以DNA一条链为模板,合成RNA。 (2)酶： 主要为RNA聚合酶。 (3)高能的底物：ATP、GTP、CTP、UTP (4)转录方向：5′ 3 ′ ，不需引物。 原核生物的RNA聚合酶 RNA聚合酶：全酶α2 ββ?σ 核心酶： α2 ββ? ′ 起始因子： σ； σ作用：识别启动子 （使RNA聚合酶结合到DNA的启动子上，参与基因转录起始有关） 真核细胞的RNA聚合酶 真核细胞具有三种RNA聚合酶，即RNA聚合酶I、II、和III，它们分别催化细胞核内的rRNA（5S rRNA除外）、mRNA和小分子RNA（tRNA和5SrRNA）的转录。除此以外，线粒体和叶绿体也含有RNA聚合酶。 10.2 转 录 过 程 (1) 转录的起始 (2) RNA链的延长 (3) 转录的终止 转录起始 ?识别转录启动子 （2）转录的延伸 一旦σ因子释放，转录就进入延伸。失去σ因子的核心酶通过松散的“滑动钳”构象握住DNA，以更快的速度沿着模板链向前推进。转录泡则随着核心酶的移动而移动，其大小维持在17 bp左右。 转录鼓泡：含有核心酶、DNA模板和新生RNA的区域称为转录鼓泡。新生RNA链与模板链DNA形成一杂交双螺旋链，约有17bp A. 依赖ρ因子的终止 新生RNA上有ρ因子的识别位点。 ρ因子与聚合酶-DNA-RNA复合物结合，并解开DNA-RNA杂交体，需ATP。 B.不依赖ρ因子的终止 转录终止区有特殊结构，容易形成多个“发卡”结构,转录产物的3’端有polyU序列。这种特殊的二级结构阻止了转录向下游继续推进。 转录后加工 转录后加工 基因转录的直接产物被称为初级转录物。初级转录物一般是无功能的，它们在细胞内必须经历所谓的转录后加工以后才会有功能。转录后加工也可能提供基因表达调控的一种手段。RNA所能经历的后加工方式可达10种以上。 原核细胞mRNA前体的后加工 在细菌，mRNA很少有后加工。但某些噬菌体mRNA会发生最简单的剪切反应，将一个多顺反子切割成单顺反子。 真核细胞mRNA前体的后加工 1) 5′-端 = 加帽 2) 3′-端 = 加尾 3) 内部 = 剪接 4) 内部=甲基化 5) 编码区=编辑 为什么要有帽子？ 提高mRNA的稳定性，有助于mRNA通过核孔从细胞核运输到细胞质 提高mRNA的可翻译性 提高剪接反应的效率。 为什么必须有尾巴？ 提高mRNA的稳定性。 增强mRNA可翻译性，提高翻译的效率 影响最后一个内含子的剪接； 通过选择性加尾调节基因的表达。 mRNA前体的剪接机制 剪接反应的“内因”——剪接信号 剪接反应的“外因”——snRNP（核糖核酸蛋白质复合物）和剪接因子 剪接反应——两次转酯反应 剪接体的组装 剪接信号 转录的起始 分为以下几步： RNA聚合酶与dsDNA非特异性结合 RNA 聚合酶全酶与启动子形成封闭复合物 封闭复合物异构化，转变成开放复合物 第一个磷酸二酯键形成 启动子清空 细菌基因转录起始过程中开放复合物的形成 细菌基因转录从起始阶段向延伸阶段的转变 转录泡的结构 （3）转录的终止 真核生物的转录终止 编码链上存在转录终止的修饰点AATAAA 依赖ρ因子的转录终止 依赖ρ因子的转录终止，也可以形成发夹结构，但是需要ρ因子的帮助，并消耗ATP 不需要ρ因子的终止机制 不需要ρ因子的转录终止 RNA聚合酶到达终止子的时候暂停。 暂停给发夹结构有时间形成 发夹结构破坏了RNA聚合酶和它的RNA产物之间的作用 富含U-的序列很容易与模板链解离 转录复合物解体，转录终止 复制和转录的异同点 5’ 3’ 5’ 3’ 合成链方向 不需要 需要 引 物 A-U,C-G, A-T,C-G 配 对 mRNA,tRNA,rRNA 子代双链DNA 产 物 不对称