细胞冻存 复苏 传代 转染.docxVIP

细胞冻存 复苏 传代 转染 细胞冻存period;复苏period;传代period;转染 细胞培养系列方法 【实验前准备】 （1）实验前准备好高压的离心管、冻存管、1ml/100ul枪头、PBS溶液。 （2）清洁超净工作台面，照紫外30分钟；同时根据需要将培养基、胎牛血清、胰酶PBS液、双抗置于室温下复温。 细胞的冻存与复苏 （1） 材料：培养的贴壁细胞（70%-80%融合）、于液氮中冻存的细胞 （2） 试剂： PBS液、0.25%胰蛋白酶液、DMEM培养基、胎牛血清、二甲亚砜（DMSO）、 （3） 设备：培养瓶、巴氏吸管、15ml离心管、1.5ml冻存管、盛酒精的喷壶、 酒精灯、水浴锅、CO2培养箱、离心机、液氮灌、倒置显微镜、超净工作 试剂配制：（1）完全培养基含90%DMEM培养液加10%的胎牛血清加1%的双抗。 （2）冻存液含80%的DMEM培养基加10%的胎牛血清加10%的DMSO，用吸管混匀，置于4℃冰箱中备用。 (1)依照传代的方法用0.25%胰蛋白酶液对处于对数生长期的单层细胞进行消化。 (2)收集消化细胞于离心管中，800-1000r/min离心5min。 (3)弃上清液，加入适量冻存液，用吸管吹打细胞制悬，调整细胞密度为5*106-1*107