茶游离氨基酸的测定.pdfVIP

茶 游离氨基酸总量测定 文件类别： 作业指导书 文件编号： 撰写单位： 版 本: 第 1 版 发行日期： 机密等级 : □ 机密 □ 一般 合计页数 : 共 2 页 核准 审核 初审 制订 会审 名称 茶 游离氨基酸总量测定 文件编号 : 1 原理 氨基酸在 pH8.0 的条件下与茚三酮共热，形成紫色络合物，用分光光度法在特定的 波长下测定其含量。 2 仪器和用具 分析天平：感量 0.0001g 。分光光度仪。 3 试剂和溶液 3.1 pH8.0 磷酸盐缓冲液： 按《茶 茶多酚测定》中 3.2 的规定，配制 1/15M 磷酸氢二钠（ 3.2.1 ）和 1/15M 磷 酸二氢钾（ 3.2.2 ）溶液。然后取 1/15M 的磷酸氢二钠溶液 95ml 和 1/15M 磷酸二氢钾溶 液 5ml，混匀。 3.2 2% 茚三酮溶液： 称取水合茚三酮（纯度不低于 95%） 2g ，加 50ml 水和 80mg氯化亚锡（ GB638-78 ， 分析纯），搅拌均匀。分次加少量水溶解，放在暗处，静置一昼夜，过滤后加水定容至 100ml。 3.3 茶氨酸或谷氨酸标准液： 称取 100mg茶氨酸或谷氨酸（纯度不低于 99%）溶于 100ml 水中，作为母液。准确 吸取 5ml 母液，加水定容至 50ml 作为工作液（ 1ml 含茶氨酸或谷氨酸 0.1mg）。 4 操作方法 4.1 取样方法 按“茶叶原料验收规范”（文件编号………… ）要求进行取样。 4.2 试液制备 按《茶 茶多酚测定》中 4.2.1 试液制备之规定，制备试液。 4.3 测定 准确吸取试液（ 4.2 ）0.5ml ，注入 25ml 容量瓶中，加 0.5ml 水， 0.5mlpH 8.0 缓 冲液（ 3.1 ）和 0.5ml 2% 茚三酮溶液（ 3.2 ），在沸水浴中加热 15min。待冷却后加水定 容至 25ml。放置 10min 后，用 10mm比色杯，在 570nm处，以试剂空白溶液作参比，测 定吸光度（ A）。 生效日期 页 次 1/2 页 序 A 表号 :R-0110-002-1A 文件标准用纸 名称 茶 游离氨基酸总量测定 文件编号 : 4.4 氨基酸定量标准曲线的制作 分别吸取 0.0 、1.0 、1.5 、2.0 、2.5 、3.0ml 氨基酸工作液（ 3.3 ）于一组 25ml 容量瓶 中，各加水至 4ml 、茚三酮溶液 （3.2 ）0.5ml 和缓冲液 （3.1 ）2ml，在沸水浴中加热 15min， 冷却后加水定容至 25ml，按 4.3 的操作测定吸光度（ A）。将测得的吸光度与对应的茶氨 酸或谷氨酸浓度绘制标准曲线。 参考标准曲线： C=0.1686*A+0.0381 5 结果计算 5.1 计算方法和公式 茶叶中游离氨基酸含量，以干态质量百分率表示，按下式计算： C B 游离氨基酸总量（ %） 1000 L 1.002 100