第20章高效液相色谱.pptx

气相色谱回顾;气相色谱固定相的分类及选择 气-固色谱吸附剂：硅胶、氧化铝 、活性碳 、高分子微球 气-液色谱固定液： 相对极性(角鲨烷P=0， ?,?’-氧二丙腈P=100) 特征常数(5种代表性化合物在被测固定液与参比角鲨烷上保留指数的差值，罗氏常数和麦式常数) 化学结构 气相色谱分离条件的优化 固定相、检测器、流动相流速、色谱柱温度 毛细管气相色谱的特点 渗透性好、相比大、总柱效高、柱容量小;第20章 高效液相色谱法;一、高效液相色谱的特点 二、高效液相色谱的分类 ;相同点 原理 仪器组成 不同点 分析对象 流动相 色谱柱温度;气相色谱：气体和沸点较低的化合物， 占有机物总数20% 高效液相色谱：高沸点、热稳定性差、分子量大的物质， 占有机物总数80%;气相色谱流动相：对组分没有亲和力的惰性气体，对分离选择性几乎无影响 高效液相色谱流动相：可选用不同极性的液体 选择余地大 对分离影响大（与组分或固定相均作用）;气相色谱柱温： 一般较高 高效液相色谱柱温：通常为室温;高压： 150 - 350 ?105 Pa 高速： 一般 1 h 高效： 柱效高 高灵敏度： 10-9 g/ml (紫外检测器） 10-12 g/ml（荧光检测器）;成本高、环境污染、梯度洗脱操作复杂。 缺少灵敏度高的通用型检测器 复杂样品分离，缺少总理论塔板数达数十万的色谱柱。 受压易分解或变性的生物样品;成本高、环境污染、梯度洗脱操作复杂。 Solution: 微型化（毛细管色谱柱）、水为流动相等;; ZORBAX 300SBC18 5 μm particles H.-F. Yin et al., presented at the 18th International Symposium on Microscale Separations and Analysis, HPCE, San Diego, January 2003.;;缺少灵敏度高的通用型检测器 Solution: 蒸发光散射检测器 ? 质谱检测器 ;复杂样品分离，缺少总理论塔板数达数十万的色谱柱。 Solution: UPLC (UHPLC) 耐受压力：350 ?105 Pa ;;按分离原理分类： 分配色谱 吸附色谱 离子交换色谱 尺寸排阻色谱 疏水作用色谱 ;按分离规模分类： 制备色谱 柱内径10mm 半制备色谱 柱内径5-10mm 分析型色谱 柱内径 5 mm;20-2 高效液相色谱仪;高效液相色谱仪的结构 高效液相色谱仪的主要部件;一、高效液相色谱仪的结构;高压输液系统 进样系统 分离系统 检测系统 附属系统;储液罐 高压输液泵 过滤器 压力脉动阻尼器;必须有足够的容积 与溶剂不发生化学反应 便于对溶剂进行脱气 不锈钢、玻璃、氟材料 容积：500 - 2000 cm3;过滤：除去溶剂中的固体微粒 脱气：除去溶剂中溶解的气体;滤膜过滤 0.22 or 0.45 μm滤膜 过滤器 烧结不锈钢材料制成 孔径：2 - 10?m ;超声波清洗器 在线真空脱气机;对泵性能的要求 输出压力高 150 - 300 bar 流量范围广 0.1 -- 10 mL/min 可调 流量稳定 无脉动，流量精度 0.5% 左右 耐腐蚀 适用于各种有机溶剂、水、缓冲溶液;往复泵;单泵与双泵;梯度淋洗装置;;;取样和进样功能 手动和自动 要求： 密封性好 死体积小 重复性好 进样时对色谱系统的压力和流量波动小;手动进样;;;自动进样器;色谱柱 柱温箱*;柱材料：不锈钢 柱长度： 5 - 30 cm 柱内径：2 - 5 mm 填料：3 - 10?m 填充：匀浆法;;高效液相色谱柱;干法装柱：填料20μm 湿法装柱：填料20μm;;填料质量好 制备好固定相匀浆 匀浆浓度合适 匀浆内不得残留空气 装填压力选择适当 死体积小;填料热力学特性影响色谱柱的选择性 填料的动力学性质或结构特点影响色谱柱的效率 颗粒的大小、形状、均匀性、比表面积 孔径、孔体积等;全多孔型（porous particle) 球形 不规则形 无孔小粒径型(non-porous small particle) 表面多孔型(porous layer beads) 贯流型粒子(flow-through particle) 贯穿孔(through pores, 600-800 nm) 扩散孔(diffuse pores,50-1