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- 2021-11-08 发布于江苏
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DNS 法测淀粉酶活性
DNS 溶液配方:
酒石酸钾钠:182g 溶于 500ml 蒸馏水中,加热在热溶液中依次加入:3,5-二硝基水杨酸:6.3g
氢氧化钠:20.69g
苯酚:5ml 亚硫酸钠:5g
搅拌溶解后,冷却定容 1L,贮于棕色瓶中一周后使用。
葡萄糖标准曲线的测定
称取 0.1g葡萄糖(干燥至恒质量),放入 5mL 的容量瓶中定容,配成浓度为 20mg/mL 的葡萄糖溶液。
再取 2 个 5mL 的容量瓶,分别吸取 250μL 的上述葡萄糖溶液加入到 2 个容量瓶中,定容,配成 1mg/mL 的母液。
取 11 个 1mL 的离心管,标号,分别吸取0、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000μL 上述母液加入到离心管中, 然后补加水到 1mL ,制成浓度分别为 0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0mg/mL 的葡萄糖标准液。
将上述各标准溶液转加到25mL 的试管中,各加1mL 的DNS 溶液, 90℃水浴 5min,流水迅速冷却,加水定容至 25mL 。
在 540nm 下测定吸光值,绘制葡萄糖浓度与OD 值的标准曲线。
二硝基水杨酸(DNSA )来测量可溶性淀粉中释放的还原糖。
1、 反应混合液包括:50ul酶(菌株液体摇瓶,取菌悬液离心,取上清作为酶液)+450ulBuffer
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