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动物细胞工程使用 动物细胞工程 专题2 细胞工程 ◆动物细胞培养 ◆动物细胞融合 ◆单克隆抗体制备 ◆动物体细胞核移植技术和克隆动物 思考与回忆： 1、动物细胞全能性特点？ 随着细胞分化程度的提高而逐渐受到限制，分化潜能变窄。细胞核仍具有全能性。 2、能否用植物组织培养的方法使动物细胞发育成动物个体？ 不能。动物细胞和组织在体外培养的过程中，伴随一定的组织分化，不管采用什么手段和培养条件，由于细胞的运动、变化，细胞发生结构功能变异，结果长时间的培养只能使单一类型的细胞保存下来，最终成了简单的细胞培养。 3、动物的细胞培养的理论依据（原理）？ 细胞增殖 动物细胞培养 动物细胞融合 单克隆抗体技术 核移植 动物细胞工程常用技术 其它动物细胞工程的基础 一、动物细胞培养的应用和概念： 1、概念：动物细胞培养就是从动物有机体中取出相关的组织,将它分散成单个细胞,然后,放在适宜的培养基中,让这些细胞生长和增殖. 2、原理：细胞增殖 定义：人们通常将动物组织消化后的初次培养称为原代培养。 胰蛋白酶处理 取出组织 胚胎或幼龄动物器官组织 剪碎 单个细胞 细胞悬液 转入培养瓶内培养 （ 贴壁生长长成单层细胞。有接触抑制现象）。 ①原代培养 3：过程 图示 原代培养 强调一：细胞贴壁过程 ■细胞贴壁：在培养瓶悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。 ■培养瓶或培养皿壁要求：表面光滑、无毒、易于帖附。 ■当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时,细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。 强调二：接触抑制 定义： 当原代培养的细胞处于接触抑制后, 用胰蛋白酶处理,使细胞从瓶壁上脱离下来,然后加入新的培养液,将细胞分离稀释,并从原培养瓶内转接到新的培养瓶内,这个过程称传代培养.（分瓶培养的过程） ②传代培养 3、总结：动物细胞培养过程 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官 配置细胞悬液 剪碎用胰蛋白酶处理 10代细胞 转入培养瓶 40-50代细胞 传代培养 无限传代 单个细胞 加培养液稀释 传代10代以内，遗传物质不改变，保持正常二倍体核型。 传代10-50代左右，增长缓慢以至于完全停止，部分细胞核型可能发生变化（遗传物质可能改变） 为什么用胰蛋白酶处理？ 分瓶传代培养 原代培养特点：细胞贴壁、接触抑制 继续传代培养少部分细胞获得不死性，细胞突变，遗传物质已经改变，等同于癌细胞。 原代培养 细胞悬浮液 10代细胞 50代细胞 无限传代 原代培养 传代培养 知识点小结：各个新名词之间的联系 多数组织细胞固定在表面生长和分裂。 随细胞增多，细胞就会停止分裂增殖 4.动物细胞培养的条件: 1）无菌无毒 的环境： 适宜的温度：人和哺乳动物细胞最适温度为±0.5℃。 适宜的酸碱度：PH： 液体合成培养基：（糖、氨基酸）、促生长因子、（水、无机盐、微量元素）等；通常还需加入血浆、血清等天然成分。 4）气体环境： 2）营养： 3）温度和pH： “95％空气+5％CO2”的混合气体培养箱。氧气是细胞代谢必须的； CO2维持培养液的PH。 对培养液和所有培养用具无菌处理；培养液中添加抗生素防止培养过程中污染；定期更换培养液以清除代谢产物，防止对培养细胞造成危害。 问题3：为什么用胰蛋白酶处理？ 问题1：、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料？ 因为其细胞生命力旺盛，分裂能力强，分化程度低。 问题2、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？ 扩大细胞与培养液的接触面积，利与细胞吸收营养。 动物组织细胞间隙中含有一定量的弹性纤维等蛋白质，胰 蛋白酶处理动物组织，可以使动物组织细胞间的蛋白质和 细胞外的其他成分酶解，获得单个细胞。 问题4：为什么用胰蛋白酶处理而不用胃蛋白酶？ 动物细胞培养的最适PH值为，胰蛋白酶作用的适宜PH为，胃蛋白酶适宜PH为2.胃蛋白酶在PH为的动物细胞培养中无活性。 问题5：用胰蛋白酶处理不会把所培养的细胞消化掉吗？ 控制好时间！长时间处理当然会损伤细胞。 问题6、动物细胞培养液的主要成分是什么？较植物组培培养基有何独特之处？ 问题7、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成新个体？ 主要成分：（葡萄糖、氨基酸）、（水、无机盐）、维生素和动物血清等。独特之处有：1、液体培养基 2、成分中有动物血清等 不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，不能发育成新的动物个体 问题8、动物细胞培养的原理： 细胞增殖。 问题9、目前使用的或冷冻保存的正常细胞通常在10代以内，为什么？ 10代以内的细胞遗传物质不改变，保持正常二倍体核型。 5.动物细胞培养技术的应用: 1.蛋白质生物制品的生产 如病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体 2.应用于基因工程 主要用于作