高中生物比浊计、光电比色计和分光光度计的比较和考题应用.pdfVIP

选修释疑】比浊计、光电比色计和分光光度计的比较和 考题应用 原创：徐文新浙江生物 浙科版必修 3 教材酵母菌数量的计数用到了比浊法或比色法， 比浊法是怎么样的一种 方法？选修 1 亚硝酸盐的测定中用到了光电比色法，那么比浊计、光电比色计和分光 光度计有什么区别呢？ 先看一道刚刚考过的高三入学试题： 已知氨和纳氏试剂反应生成淡红色络合物， 用光程为 1cm 的比色杯在 570nm 处测定光密度值，若光密度值偏低，应选择 （A.增大光程，光波长不变 B.增大光程，光波长增加 C. 减小光程，光波长不变 D. 减小光程，光波长不变） 你会选择哪个答案？为什么呢？什么是光程？为什么这个实验是 570nm 而不 是 550nm ？一系列的问题困扰着了许多老师和同学。 让我们把这个测定方法的 “前世今生”理一理。解析看下面，答案见文章最后。 首先比浊计、光电比色计和分光光度计原理原理是相同的，实验方法 也相似。通常，比色计或分光光度计都可用于比浊分析。也有专门用 于比浊分析的仪器，即浊度计或比浊计。 一、比浊法简单介绍 比浊法又称浊度测定法。为测量透过悬浮质点介质的光强度来确定悬 浮物质浓度的方法，这是一种光散射测量技术。 免疫比浊法，散射比浊法，光扫描比浊法，乳胶比浊法，光电比浊法， 微生物比浊法等十余类。 在水质监测和管理过程中，比浊法常用于测量饮用水、工业用水、废 水的透明度；也用于测量空气及其他各种气体中悬浮固体的含量，是 空气和水污染研究的一种工具。在酿造工业中，比浊法常用于各种饮 料澄清过程的控制和过滤过程的监控。 二、光电比浊计数法原理 细菌菌体是不透光的，光束通过细菌悬液，将会由于被散射或被吸收 而降低其透过量。细菌悬液的浓度同光密度成正比， 同透光度成反比， 而光密度或透光度可以借光电池精确测出。所以可用光电比浊计来测 定细菌相对数目。可先用血球计数板计数，再将菌悬液分别稀释调整 为每毫升含不同的菌数，通过分光光度计分别测定其光密度（尽量控 制光密度值在 0.1-0.65 之间，以得到较高精确度）。然后以光密度（OD ） 作纵坐标，以每毫升不同菌数为横坐标绘制标准曲线。再将待测菌悬 液适当稀释，同法进行比浊测定，根据所测光密度值就可以从标准曲 线上查得每毫升的细菌数。此法简便、迅速，可以节省许多稀释平板 计数法的时间，便于在生产实践中控制细胞的数目。但颜色太深的样 品或在样品中还含有其他物质的悬液，不能用此法测定。 三、光电比色计比分光光度计要落后 光电比色法是在光电比色计上测量一系列标准溶液的吸光度，将吸光 度对浓度作图，绘制工作曲线，然后根据待测组分溶液的吸光度在工 作曲线上查得其浓度或含量。与目视比色法相比，光电比色法消除了 主观误差，提高了测量准确度，而且可以通过选择滤光片来消除干扰， 从而提高了选择性。但光电比色计采用钨灯光源和滤光片，只适用于 可见光谱区和只能得到一定波长范围的复合光，而不是单色光束，还 有其他一些局限，使它无论在测量的准确度、灵敏度和应用范围上都 不如紫外-可见分光光度计。 20 世纪 30～60 年代，是比色法发展的 旺盛时期，此后就逐渐为分光光度法所代替。 四、分光光度技术 有色溶液对光线有选择性的吸收作用， 不同物质由于其分子结构不同， 对不同波长线的吸收能力也不同，因此，每种物质都具有其特异的吸 收光谱。有些无色溶液，光虽对可见光无吸收作光光度技术吸收用， 但所含物质可以吸收特定波长的紫外线或红外线。分光谱来鉴定物质 性质及含量的技术，其理论依据是 (分光光度法 )主要是指利用物质特 有的 Lambert 和 Beer定律。分光光度法是比色法的发展。比色法只 限于在可见光区，分光光度法则可以扩展到紫外光区和红外光区。比 色法用的单色光是来自滤光片， 谱带宽度从 40 －120nm ，精度不高， 分光光度法则要求近于真正单色光， 其光谱带宽最大不超过 3－5nm ， 在紫外区可到 1nm以下，来自棱镜或光栅，具有较高的精度。 五、物理原理简单介绍 六、几个重要问题分析 1、入射光波长的选择 选择被测物质的最大吸收波长作为入射光波长。这样，灵敏度较高， 偏离朗伯-比耳定律的程度减小。当有干扰物质存在时，应根据“吸收 最大、干扰最小”的原则选择入射光波长。 请注意：光程就是指溶液的厚度， 通俗地说，比色杯的光程指的是单 色光线通过的路程（光程）。 1 厘米比色杯是指入射光通过该比色杯 溶液的路程（光程）是 1厘米。改变