丙二醛(mda)含量的测定复习课程.pptVIP

* * 丙二醛（MDA）含量(hánliàng)的测定 丙二醛是膜脂过氧化最重要的产物之一。植物在逆境(nìjìng)下遭受伤害与活性氧积累诱发的膜质过氧化作用密切相关。 植物(zhíwù)生理学实验课件 第一页，共10页。 植物在逆境下遭受伤害（或衰老）与活性氧积累诱发的膜脂过氧化作用密切相关，膜脂过氧化的产物(chǎnwù)有二烯轭合物、脂类过氧化物、丙二醛、乙烷等。其中丙二醛（MDA：Malondialdehyde）是膜脂过氧化最重要的产物(chǎnwù)之一，因此可通过测定MDA了解膜脂过氧化的程度，以间接测定膜系统受损程度以及植物的抗逆性。 原理(yuánlǐ) 第二页，共10页。 丙二醛在高温及酸性环境(huánjìng)下可与2-硫代巴比妥酸（TBA）反应产生红棕色的产物3,5,5′-三甲基恶唑2,4-二酮（三甲川），该物质在532 nm处有一吸收高峰，并且在660nm处有较小光吸收。根据其532 nm的消光值可计算出溶液中丙二醛的含量。醛、可溶性糖对此反应有干扰，在450 nm处有一吸收峰，可用双组分分光光度法加以排除。 原理(yuánlǐ) 硫代巴比妥酸 丙二醛 3,5,5′-三甲(sān jiǎ)基恶唑2,4-二酮 （三甲(sān jiǎ)川） 第三页，共10页。 仪器设备 分光(fēn ɡuānɡ)光度计； 研钵； 剪刀； 恒温水浴； 试管：20 mL×4 离心机。 第四页，共10页。 试剂(shìjì) 1. 5 %三氯醋酸； 2. 0.5 %硫代巴比妥酸（用5 %三氯醋酸溶解(róngjiě)定容）； 3. 0.05 mol · L–1磷酸缓冲液， pH 7.8。 第五页，共10页。 材料(cáiliào) 正常(zhèngcháng)生长的以及经逆境处理的小麦、玉米或其他植物的叶片。 第六页，共10页。 方法(fāngfǎ)与步骤 1．取小麦植株上不同叶位的叶片3~5片，洗净擦干，剪成0.5 cm长的小段，混匀。 2．称取叶片切段0.3 g，放入冰浴的研钵中，加入少许石英砂和2 mL 0.05 mol · L-1磷酸(lín suān)缓冲液，研磨成匀浆。将匀浆转移到试管中，再用3 mL 0.05 mol · L-1磷酸(lín suān)缓冲液，分三次冲洗研钵，合并提取液。 3．在提取液中加入5 mL 0.5 %硫代巴比妥酸溶液，摇匀。 4．将试管放入沸水浴中煮沸10 min，（自试管内溶液中出现小气泡开始计时）。到时间后，立即将试管取出并放入冷水浴中。 5．待试管内溶液冷却后，3000×g离心15 min，取上清液并量其体积。以0.5 %硫代巴比妥酸溶液为空白测532 nm、600 nm和450 nm处的消光值。 第七页，共10页。 计算结果 式中，Vt：提取液总体积（mL）； Vs：测定(cèdìng)用提取液体积（ml）； FW：样品鲜重（g）。 第八页，共10页。 注意事项 1．可溶性糖与TBA显色反应的产物在532 nm也有吸收（最大吸收在450 nm），当植物(zhíwù)处于干旱、高温、低温等逆境时可溶性糖含量会增高，必要时要排除可溶性糖的干扰。 2．低浓度的铁离子能增强MDA与TBA的显色反应，当植物(zhíwù)组织中铁离子浓度过低时应补充Fe3+（最终浓度为0.5 nmol · L-1） 3．如待测液浑浊，可适当增加离心力及时间，最好使用低温离心机离心。 第九页，共10页。 * * 词语：原理 拼音：yuánlǐ 解释：具有普遍意义的最基本的规律。科学的原理，由实践确定其正确性，可作为其他规律的基础。也指具有普遍意义的道理。毛泽东《关于农业合作化问题》：“我们应当相信群众，我们应当相信党，这是两条根本的原理。”巴金《灭亡》第六章：“她自己也似乎受伤了。因为她所靠着生活的正是这个原理。”孟伟哉《一座雕像的诞生》第一章：“他们六个人，在没有路的山野里，凭着方向，按直线最短的原理，跌撞疾行。” 词语：处理 拼音：chǔlǐ 解释：处置；办理。唐韩愈《黄家贼事宜状》：“处理得宜，自然永无侵叛之事。”《旧唐书·韩皋传》：“皋奏报失实，处理无方。”毛泽东《改造我们的学习》：“任何一个部门的工作，都必须先有情况的了解，然后才会有好的处理。”指定刑；处罚。《北史·车路头传》：“性无害，每评狱处理，常献宽恕之议。”魏巍《东方》第四部第二三章：“你还是好好检查一下，在全体社员面前做个检讨，我可以说服大家从宽处理。” 词语：变化 拼音：biànhuà 解释：事物在形态上或本质上产生新