分子生物学08-基因的表达调控(下)--真核生物-2010-12-22PPT课件.ppt

补充： 1、 cAMP-A激酶信号传递途径:胞外信号物质(如激素) →受体→G蛋白→腺苷酸环化酶→蛋白激酶→酶或功能蛋白→生物学效应。 例如：激素（肾上腺素或胰高血糖素）与其受体在肌肉细胞外表面相结合，诱发细胞质cAMP的合成并活化A激酶，再将活化磷酸基团传递给无活性的磷酸化酶激酶，活化糖原磷酸化酶，最终将糖原磷酸化，进入糖酵解并提供ATP。 2、 A激酶（PKA）的作用： （1）A激酶（PKA）对基因表达调节。 例如， cAMP浓度升高可使某些基因表达量增加，这些基因转录调控区有共同的DNA序列，称为cAMP应答元件（CRE），转录因子称CRE结合蛋白能与CRE结合；C亚基还可催化CRE调节蛋白及转录因子磷酸化激活，促进基因转录表达。 （2）A激酶（PKA）对代谢调节。 PKA使物质代谢中关键酶磷酸化共价修饰，改变关键酶活性，可调节糖原代谢、脂肪动员等物质代谢过程。 二、 C激酶与PIP2、IP3和DAG ? C激酶（PKC） ：依赖于Ca2+的蛋白激酶。其分子量77KD，含737-872个氨基酸，C-末端是催化部位，N-末端是调节部位。 磷酸肌醇级联放大的细胞内信使是磷脂酰肌醇-4，5-二磷酸（PIP2）的两个酶解产物：肌醇1，4，5-三磷酸（IP3）和二酰基甘油（DAG）。由于IP3所引起的细胞质Ca2+浓度升高，导致C激酶从胞质转运到靠原生质膜内侧处，并被DAG和Ca2+的双重影响所激活。 C激酶的活性也受磷脂酰丝氨酸的影响，原因是后者大大提高了C激酶对于Ca2+的亲和力，从而使得C激酶能被生理水平的Ca2+离子所活化。C激酶主要实施对丝氨酸、苏氨酸的磷酸化，它具有一个催化结构域和一个调节结域。 磷脂酶C（PLC-β） 4，5-二磷酸磷脂酰肌醇（PIP2） 1，4，5-三磷酸肌醇（IP3） 二酰基甘油（DAG） 三、 CaM激酶及MAP激酶 CaM激酶（CaM-kinase）：钙调蛋白激酶，是一类丝氨酸/苏氨酸激酶，仅应答于细胞内Ca2+水平。 (钙调蛋白:是细胞内的重要调节蛋白,由一条多肽链组成,有4个结合位点,当胞浆内Ca2+增高,与其结合,其构象发生改变而激活Ca2+- CaM激酶.) MAP激酶（mitogen-activated proteinkinase, MAP-kinase）：有丝分裂原激活蛋白激酶，其活性受许多外源细胞生长、分化因子的诱导，也受到酪氨酸蛋白激酶及G蛋白受体系统的调控。MAP-激酶的活性取决于该蛋白中仅有一个氨基酸之隔的酪氨酸、丝氨酸残基是否都被磷酸化。科学家把能同时催化这两个氨基酸残基磷酸化的酶称为MAP-激酶-激酶，它的反应底物是MAP激酶。MAP-激酶-激酶本身能被MAP-激酶-激酶-激酶所磷酸化激活，后者能同时被C激酶或酪氨酸激酶家族的Ras蛋白等激活，从而在信息传导中发挥功能。 四、 酪氨酸蛋白激酶（Tyrosine protein kinase，TPK) ?特异地催化蛋白质的酪氨酸残基磷酸化，蛋白质酪氨酸磷酸化在细胞生长，分化和转化的调节中起重要作用。例：经典的src激酶家族——具有酪氨酸蛋白激酶活性的蛋白质，是连接许多细胞外和细胞内重要信号途径的膜结合开关分子。 原癌基因c-src蛋白产物Src是一种酪氨酸蛋白激酶，它有三个基本结构域：从C-端至N--端依次为SH1、SH2，SH3。SHl结构域：具酪氨酸激酶活性；SH2结构域：能识别并结合含磷酸化酪氨酸的短序列；SH3结构域：通过脯氨酸和疏水性氨基酸残基与靶蛋白结合。 五、蛋白质磷酸化与细胞分裂调控 ▲ p21蛋白过量时，细胞分裂受阻： 细胞通过p53及p21蛋白控制 CDK（cyclin-dependent protein kinase)活性，调控细胞分裂的进程。如果p21蛋白过量，大量细胞周期蛋白E-CDK2复合物与p21蛋白结合，使CDK2丧失磷酸化pRb蛋白的功能。没有被磷酸化的pRb蛋白与转录因子E2F结合并使后者不能激活一系列与DNA合成有关的酶，导致细胞无法由G1进入S，细胞分裂受阻。 ? 第六节 蛋白质乙酰化、激素与热激蛋白对基因转录的调控 一、蛋白质乙酰化对基因转录的调控 1、组蛋白的乙酰化与去乙酰化 （1）乙酰化与去乙酰化的修饰位点——“尾巴” “尾巴”：核心组蛋白的朝向外部的N端部分。 其修饰酶分别为组蛋白乙酰基转移酶（HAT） 和去乙酰化酶（HDAC）。