分子发光光谱法PPT课件.ppt

当A﹤0.05时，方括号中其它各项与第一项相比可忽略不计，上式简化 If = 2.3 ?f I0A =2.3 ?f I0 ?bc 当A﹤0.05时， If与 ?f 、I0、 ?和c 有关，对一给定物质，当激发光波长和强度一定时， ?f 、I0、 ?和b为常数，合并为K If = KC Ip = KC 定量分析依据 荧光强度与物质浓度呈线形关系，If=KC只有在浓度低时使用，荧光物质测定的是微量或痕量组分，灵敏度高。 浓度高时， If与C不呈线形关系，有时C增大， If反而降低因为公式[ ]中后面影响，有时发生荧光猝灭效应。 （一）荧光分析仪器——主要由光源、单色器、液槽、检测器和显示器组成 光源 第一单色器 液池 第二单色器 检测器 放大器及记录器 ex ? em 与分光光度计有两点不同 ①两个单色器 ②检测器与激发光互成直角 I0 §5.3 荧光和磷光分析仪 1、光源 激发光源一般要求比吸收测量中的光源有更大的发射强度；适用波长范围宽 荧光光度计中常用高压汞灯和氙弧灯 利用汞蒸气放电发光的 光源；常用其发射365 nm、 405 nm、 436 nm 三条谱线 以365 nm 的谱线最强 应用最广泛的一种光 源，可发射250~800nm 很强的连续光源 2、单色器 大多数荧光光度计一般采用两个光栅单色器，有较高的分辨率，能扫描图谱，既可获得激发光谱，又可获得荧光光谱 第一单色器作用：分离出所需要的激发光，选择最佳激发波长? ex ，用此激发光激发液池内的荧光物质 ? ex。 第二单色器作用：滤掉一些杂散光和杂质所发射的干扰光，用来选择测定用的荧光波长? em。 在选定的? em 下测定荧光强度，定量分析。 3、样品池 盛放测定溶液，通常是石英材料的方形池，四面都透光，只能用手拿棱或最上边。 4、检测器 把光信号转化成电信号, 放大, 直接转成荧光强度 荧光的强度一般较弱，要求检测器有较高的灵敏度，荧光光度计采用光电倍增管。 荧光分析比吸收光度法具有高得多的灵敏度，是因为荧光强度与激发光强度成正比，提高激发光强度可 大大提高荧光强度 （二）磷光分析仪器 与荧光分析仪器相似，主要差异如下： 1. 试样室 试样需在液氮温度（77K，-196℃）下测定低温磷光（将液池放在盛放液氮的杜瓦瓶内） 固体表面室温磷光分析需特制试样室 2. 磷光镜 有些物质既可产生荧光，又能产生磷光。用机械切光装置——磷光镜区别荧光和磷光。利用荧光寿命短，磷光寿命长消除荧光干扰。 （一）定量分析方法 定量分析依据 If = KC Ip = KC 1. 标准曲线法——最常用的定量分析方法 将已知量的标准物质与试样在相同条件下处理，配制一系列标准液，测定它们的相对发光强度。 以相对荧光强度为纵坐标，以标准溶液的浓度为横坐标 §5.4 荧光和磷光分析及其应用 2. 荧光猝灭法 把荧光猝灭用在定量分析上，具有较高的灵敏度和选择性 若荧光物质 M 与猝灭剂 Q 生成不发荧光的基态配合物MQ M + Q = MQ（非荧光物质） 经推导得出： 猝灭剂加入前 的荧光强度 猝灭剂加入后试 液的荧光强度 常数 猝灭剂浓度 I前/I后与C（Q）有线性关系，可求猝灭剂含量 与标准曲线法相似，对一定浓度的荧光体系，分别加入一系列不同量的猝灭剂 Q ，配成一个荧光物质—猝灭剂体系，然后在相同条件下测定它们的荧光强度，得一曲线 取相同荧光物质 CM CM CM CM … CM 加不同量Q CQ0 CQ1 CQ2 CQ3 … CQx (CQ0 =0) 测 If I前 I后1 I后2 I后3 … I后 x 计算 I前/I后 I前/I后1 I前/I后2 I前/I后3 … I前/I后x CQx CQ I前/I后x I前/I后 3. 比较法——比较简单 如果试样数量不多，可用比较法进行测量 配一标准溶液浓度为Cs， Cs与未知液浓度Cx相近，并在相同条件下测定它们的荧光强度 未知液 If x = KCx 标准液 If s = KCs 比较 4. 多组分混合物的荧光分析 (1) 如果两组分的荧光峰相互不干扰,可直接测定 可分别在各自的?荧波长处测定,求出