植物基因克隆的方法 .pptxVIP

植物基因克隆的方法基因:为RNA或蛋白质编码的核苷酸序列。基因克隆:利用体外重组技术,将特定基因 和其它DNA顺序插入到载体中。克隆目标:识别、分离特异基因并获得基因 的完整全序列,确定染色体位, 阐明基因的生化功能,明确其对 特定性状的遗传控制关系。 植物基因克隆的方法序列克隆2、 依据序列同源性克隆基因3、 人工合成并克隆基因4、 表型克隆5、 功能克隆6、 定位克隆7、 转座子标记法序列克隆1、1 依照已知基因的序列方法一:依照已知基因的序列设计并合成一 对引物,从植物中提取DNA进行PCR扩 增,扩增的片段经纯化后连接到合适的 载体上,用酶切和序列分析检测重子, 并与已知基因序列进行比较。方法二: 在其它种属的同源基因被克隆的前提下,构建cDNA文库或基因组文库,然后以已知的基因序列作为探针来筛选目的克隆。例子:依照甜菜碱醛脱氢酶基因序列克隆 菠菜碱醛脱氢酶基因、自交不亲和 基因、花形态建成基因。 1、2依照DNA测序结果方法一: 利用Adams等建立的表达序列标 记(EST)寻找新基因、从组织或细胞特异性的cDNA文库中随机挑选克隆→5’端或3’端部分序列(EST,约400bp)测定→GeneBank/EMBL检索→检测所测序列或氨基酸序列与已知序列是否同源→发现新基因方法二: 利用Velculescu等建立的基因 表达 连续分析法(SAGE)、◆ 此种方法只需检测基因