真菌学及检验.ppt

（二）培养检查法 1、培养基 常用真菌培养基及用途 培 养 基 　用 途 　沙保培养基　　　　　　 真菌的常规培养 放线菌酮－氯霉素琼脂　　 同上 玉米粉聚山梨酯－80琼脂 观察白假丝酵母菌的厚膜孢子 马铃薯葡萄糖琼脂　 观察真菌菌落色素，用于鉴别 尿素琼脂　　　　　　　　 用生化反应鉴别真菌 （红色癣菌和石膏样癣菌） 心脑浸液葡萄糖血琼脂　　 深部真菌培养（二相性真菌） 2、培养方法 接种工具为接种钩、接种针和接种环 （1）直接培养 （2）试管培养：多用于菌种传代接种与保存。 （3）大培养：用平皿或培养瓶培养。 （4）小培养 可观察结构特征及发育的全过程。 1） 玻片培养 2）郭可大钢圈小培养法： 材料：培养基、钢环（用铁环或废电线之铝丝制成）、载玻片、盖玻片、毛细管、石蜡等。 先将无菌钢圈以热石蜡固定在玻片和盖玻片之间，钢环开口处深入底部加入培养基。加够半环即可凝固。用接种针取少量材料，接种在培养基表面。 　　 将接种好的玻片，放在平皿内，并放湿纱布以防干燥。逐日镜 检，一般约7ｄ即可长好。根据菌丝和孢子的结构特点进行真菌类别的鉴定。 真菌培养是目前鉴定真菌的唯一方法。培养真菌的温度为28℃，但深部真菌为37℃。菌落是鉴别真菌的方法。 （三）真菌的鉴定 方法： 1、生化反应 2、芽管形成 3、厚膜孢子生成 4、免疫学及分子生物学试验等。 1.真菌的生化反应 用于主要深部感染真菌如假丝酵母菌、隐球菌等。 1）糖(醇)类发酵试验 37℃，观察糖发酵情况。 2）同化碳源试验 含菌生理盐水与已融化的固体同化碳源培养基(45℃)混合，然后在培养基上分别加糖，置25℃孵育观察结果。若24h后无变化可重复加糖。如能同化则在糖周围有生长圈，否则无生长。一般对双糖发酵的真菌能同化或利用糖类或碳源。主要用于酵母菌的鉴定。 3）同化氮源试验 同化碳源试验相同，但 需用无氮源的培养基，不要加糖类，而加入硝酸钾。用于观察酵母菌对硝酸钾的利用情况。 4）明胶液化试验：某些真菌可液化明胶。 5）尿素分解试验 石膏样癣菌、新生隐球菌等可分解尿素。 6）测定淀粉样化合物：某些真菌可产生淀粉样化合物，遇碘后变成兰色。 7）牛乳分解试验；真菌可使牛乳酸化、凝固、胨化、碱化等 2.核酸检测 医学真菌的鉴定手段引入了分子生物学的鉴定方法，从核酸碱基G+Cmol％分析、限制性片段长度多态性(RFLP)Southern印迹分析到脉冲场凝胶电泳(PFGE)PCR指纹、随机扩增多态性DNA(RAPD)以及DNA特殊片段测序等。 单细胞真菌 （酵母菌） 多细胞真菌 真菌菌丝的形态 真 菌 无 性 孢 子 形 态 芽生孢子 厚膜孢子 关节孢子 小分生孢子 大分生孢子 1叶状孢子 2分生孢子 芽生孢子 Candida albicans -- chlamydospore formation on cornmeal agar假丝酵母菌 厚膜孢子 3、孢子囊孢子 孢子囊孢子 真菌的有性孢子 （根霉菌的接合孢子） 假丝酵母菌菌落 * * 真菌学及检验 1、掌握真菌的概念 2、掌握真菌的生物学性状。 3、了解真菌的致病性与免疫性。 4、掌握真菌的常规检查法。 目的与要求 真菌的基本性状 真菌（Fungus）概念: 是一类有典型的细胞核和完整细胞器，不含叶绿素，不分根、茎、叶的真核细胞型微生物。 细胞结构完整。 具有典型细胞结构（细胞核、细胞器、细胞壁） 细胞壁含几丁质和（或）纤维素 无根、茎、叶，不含叶绿素 以腐生或寄生方式摄取养料 能进行有性生殖和（或）无性繁殖 Fungus 特点 第一节 真菌的生物学地位与分类 生物学地位：真菌界 分类： 真 菌 界 粘菌门 (Myxomycota) 真菌门 (Eumycota) 接合菌亚门 子囊菌亚门 担子菌亚门 半知菌亚门 对人类致病的真菌分为： 浅部真菌：侵犯皮肤、毛发、指甲，为慢性， 对治疗有顽固性，但影响身体较小 深部真菌：可侵犯全身内脏，严重的可引 起死亡。 　　此外