基因工程步骤最新版本.ppt

基因工程的基本步骤;基因操作的基本步骤;基 因 工 程 的 基 本 过 程; 基因操作的基本步骤;目前被较广泛提取使用的目的基因有： 苏云金杆菌抗虫基因、人胰岛素基因、人干扰素基因、种子贮藏蛋白基因、植物抗病基因等。;目的基因的提取方法;1）鸟枪法：; 用DNA重组技术将某种生物的总DNA用特定的限制性内切酶切割成一个个片段，然后将这些片段随机地连接在某些质粒或其他载体上，再将它们转移到适当的宿主细胞中，通过细胞的增殖而构成各个片段的无性繁殖系（克隆），当这些克隆多到可以包??某种生物的全部基因时，这一批克隆的总体就称为该种生物的基因文库。;;基因组DNA文库; 以目的基因转录成的信使RNA为模板，反转录成互补的单链DNA，然后在酶的作用下合成双链DNA，从而获得所需的基因。;3）根据已知的氨基酸序列合成DNA法 ：;上述三种目的基因提取的方法有何优缺点？;哪些新技术能大大简化基因工程的操作技术？;PCR 可以把 指定的基因片段 数量放大;2）聚合酶链式反应即PCR技术;（二）基因表达载体的构建;基因表达载体的组成：;启动子：位于基因的首端的一段特殊的DNA片断，它是RNA聚合酶识别和结合的部位，有了它才能驱动基因转录出mRNA，最终获得蛋白质;终止子：位于基因的尾端的一段特殊 的DNA片断，能终止mRNA的 转录;目的基因;（三）目的基因导入受体细胞;方法;1、将目的基因导入植物细胞的方法：农杆菌转化法 （1）农杆菌介绍 （2）原理及适用范围;2、将目的基因导入动物细胞 （1）方法：显微注射法 （2）程序： ;2.微生物作受体细胞原因：;（四）目的基因的检测和表达;再次检测;; 不能，受体细胞必须表现出特定的性状，才能说明目的基因完成了表达。;　　多细胞生物的检测，将每个受体细胞单独培养并诱导发育成完整个体，检测这些个体是否摄入目的基因，摄入的基因是否表达（是否表现出相应的性状）。淘汰无变化的个体，保留有相应变化的个体进一步培养、研究。;从苏云金芽苞杆菌中提取抗虫基因;重组DNA技术操作的主要步骤;1）以下说法正确的是 （ ） A、所有的限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列 B、质粒是基因工程中唯一的运载体 C、运载体必须具备的条件之一是：具有多个限制酶切点，以便与外源基因连接 D、基因控制的性状都能在后代表现出来;2）不属于质粒被选为基因运载体的理由是 A、能复制 （ ） B、有多个限制酶切点 C、具有标记基因 D、它是环状DNA;3）有关基因工程的叙述中，错误的是（ ） A、DNA连接酶将黏性末端的碱基对连接起来 B、 限制性内切酶用于目的基因的获得 C、目的基因须由运载体导入受体细胞 D、 人工合成目的基因不用限制性内切酶;4）有关基因工程的叙述正确的是 （ ） A、限制酶只在获得目的基因时才用 B、重组质粒的形成在细胞内完成 C、质粒都可作为运载体 D、蛋白质的结构可为合成目的基因提供资料;5）基因工程是在DNA分子水平上进行设计施工的。在基因操作的基本步骤中，不进行碱基互补配对的步骤是 （ ） A、人工合成目的基因 B、目的基因与运载体结合 C、将目的基因导入受体细胞 D、目的基因的检测和表达