共聚焦显微镜-汇报PPT课件.ppt

激光扫描共焦显微镜技术及应用;基本介绍;;共聚焦显微镜的原理简介（ Confocal Laser Scan Microscope CLSM） 从某种意义上讲，共聚焦显微镜是一种现代化的光学显微镜，它对传统的光镜从以下几方面作了改进;在显微镜基础上配置激光光源，扫描装置，共扼聚焦装置和检测系统而形成的新型显微镜。 利用共聚焦光路和激光扫描获得生物样品的显微断层图象，动态扫描记录、图像处理及三维立体构建、成份分析等软件。;激光共聚焦显微镜构成;共聚焦显微镜的特点; 1、光源 用激光做光源，从理论上消除了色差。因为激光的单色性强、光源波束集中、波长相同。 2、采用了共扼聚焦技术 在物镜的焦平面上放置了一个小孔，将焦平面以外的杂散光挡住，消除了球差。;共扼聚焦原理图;;;;;3、点与面扫描技术 共聚焦显微镜：将样品分解成二维或三维空间上的无数点，用十分细小的激光束（点光源）逐点逐行扫瞄、成像，通过计算机软件组合，最后得到一个整体平面的或立体的像。 普通光镜：是在可见光源下一次性成像。;4、图像信号及处理： 光电倍增管放大信号，计算机采集和处理光信号。 计算机代替了人眼或照相机进行观察、摄像，得到的图象是数字化的，可以在电脑中进行处理，再一次提高图象的清晰度。;共聚焦显微镜的应用;高清晰成像;牛肺动脉内皮细胞 ，微管;牛肺动脉内皮细胞 ，微管;鼠成纤维细胞 单克隆anti–β-tubulin 标记 ;检测人类癌细胞表皮生长因子;培养的293细胞绿色荧光蛋白;培养的人肝癌细胞哑叮橙染色;透射光扫描（DIC）;树突状细胞;培养细胞;荧光表达量测定;;分层扫描（切片扫描）;分层扫描（切片扫描）;分层扫描（切片扫描）;分层扫描（切片扫描）;分层扫描（切片扫描）;植物切片三维重建;多色荧光标记检测;Mouse 3T3 cells 红色：ethidium homodimer–1 ，染核 绿色：BODIPY FL phallacidin，染肌丝蛋白;牛肺动脉内皮细胞 蓝色：Hoechst 33342 染DNA 红色：PI，染核仁RNA 绿色：Alexa Fluor 488 染肌丝蛋白 ;藤黄微球菌 绿色：活菌 红色：死菌 染色：LIVE/DEAD BacLight Bacterial Viability Kit ;猴胚肾细胞内弓形虫繁殖 吖叮橙染色 绿色为DNA 红色为RNA;激光共聚焦显微镜的优势;激光共聚焦显微镜的优势;激光共聚焦显微镜的优势;定量测量：;快速性： 由于利用光源光束点扫描，检测过程快，时间短，计算机精确控制激发光强度，光漂白和荧光淬灭作用很小。数据图像可及时输出或长期储存： 用计算机代替了普通的照相机，得到的图像是数字化的，不存在暴光方面及胶卷冲洗方面的问题（如荧光太弱，无法暴光；或曝光过程中荧光淬灭等）；而且图像可进一步加工处理。;共聚焦显微镜应用领域;共聚焦显微镜应用领域;Bing-Jie Ni at al., Microbial and Physicochemical Characteristics of Compact Anaerobic Ammonium-Oxidizing Granules in an Upflow Anaerobic Sludge Blanket Reactor, APPLIED AND ENVIRONMENTAL MICROBIOLOGY, 76(2010) 2652–2656;CLSM imaging of activated sludge A (2 days of anaerobic starvation at 4 1C) (a) and sludge B (5 days of anaerobic starvation at 41C) (b).;我的实验计划