动物细胞融合与单克隆抗体的制备(精品)PPT课件.ppt

知识回顾 ？ 再分化 一、原理： 细胞膜具有流动性 细胞的全能性 二、诱导方法： 电刺激、聚乙二醇 三、用途： 获得杂种植株 脱分化 动物细胞融合和单克隆抗体 一、动物细胞融合 有些细胞的融合是正常的生命活动。如精子与卵细胞的结合。 (一)动物细胞融合的概念 动物细胞融合也称细胞杂交,是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。 （二）动物细胞融合的过程 与植物原生质体融合原理相同，方法类似。 杂交细胞:融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞。 ⑴.原理： 与植物原生质体融合的基本原理相同，即细胞膜的流动性。 ⑵.诱导方式： 物理法： 电激、振动、离心 化学法： 聚乙二醇（PEG） 生物法： 灭活的病毒 例如：仙台病毒 仙台病毒 丧失感染性 （不感染细胞） 保留融合活性 （诱导细胞融合） 细胞A 细胞B 杂交细胞 灭活的病毒 物理法 化学法 (三)动物细胞融合的应用 1.突破有性杂交方法的局限,使远缘杂交成为可能。 2.成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段。 鼠—鸡、鼠—兔、鼠—猴、人—鼠、人—兔、 人—鸡、人—蛙、酵母菌—鸡 、人—胡萝卜等 3、重要用途：制备单克隆抗体。 二、单克隆抗体 什么是抗体？ 抗体是机体受抗原刺激后产生的、并能与该抗原发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。 1、抗体是由何种细胞产生的？ 2、抗体是如何产生的？ 3、一种B淋巴细胞能产生几种抗体？ （一）获得抗体的传统方法 1、把某种抗原反复注射到动物体内，然后从动物血清中分离出所需的抗体。 2、缺点： 产量低，纯度低，特异性差。 人们发现，在动物发生免疫反应的过程中，体内的B淋巴细胞可以产生多达百万种以上的特异性抗体，但是每一个B细胞只分泌一种特异性抗体。要想获得大量的单一抗体，必须克隆单一的B淋巴细胞，形成细胞群。 1、请从以上文字资料中找出单克隆抗体的概念 用单个B淋巴细胞进行（无性繁殖）克隆，得到的基因型相同的细胞群能够分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体，这种抗体就叫做单克隆抗体。 1、在体外培养的条件下，一个B淋巴细胞有没有可能无限增殖？ 不可能 2、我们学过的什么细胞具有这样的能力？ 癌细胞 3、有什么办法让B淋巴细胞也具有这样的能力？ 细胞融合 一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体 骨髓瘤细胞（癌细胞）能无限增殖 杂种细胞 动物细胞培养技术 ２、实验原理： 动物细胞融合 单克隆抗体 既能产生特异性抗体，又能大量繁殖 如何大量生产单克隆抗体？ 利用B淋巴细胞产生抗体的功能。 利用肿瘤细胞无限增殖的特性。 利用细胞融合的技术将两种细胞融合获得具有B淋巴细胞和肿瘤细胞特性的杂交瘤细胞。 利用动物细胞培养技术大量培养杂交瘤细胞。 应用： 动物细胞融合 设计方案： 　一个B淋巴细胞——只分泌一种特异性抗体 　小鼠骨髓瘤细胞——能无限增殖 化学性质单一、特异性强 杂种细胞 单克隆抗体的制备 单克隆抗体的特点： 单克隆抗体的制备过程 3.过程： ①免疫动物 灭活的仙台病毒 ？种 BB 、B瘤 、 瘤瘤 、 杂交细胞 ②免疫B细胞和骨髓瘤细胞的制备 ③细胞融合 ④杂交瘤细胞的选择培养 ⑤杂交瘤细胞的筛选 ⑥分泌单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立 ⑦单克隆抗体的大量制备 ？ ？ 抗原 效应B细胞 筛选 筛选 过程： 抗原 小鼠 效应B细胞 骨髓瘤细胞 杂交瘤细胞 细胞融合、筛选 多孔培养板单个　细胞培养，筛选 能产生特定抗体的细胞群 体外培养 体内培养 提取出单克隆抗体 1.在制备单克隆抗体的过程中，选用哪两种细胞进行融合？为什么选择这两种细胞？ 浆细胞和骨髓瘤细胞 浆细胞能产生单一抗体，但不能无限增殖；骨髓瘤细胞能无限增殖，但不能产生单一抗体。 2、在这过程中进行了几次筛选？分别在哪个步骤进行筛选？ 两次筛选。第一次在B细胞和骨髓瘤细胞融合以后筛选出杂交瘤细胞； 第二次在杂交瘤细胞中筛选出能产生所需抗体的杂交瘤细胞。 １可用于作为诊断试剂：有准确，高效，快速的优点 ２可用于疾病治疗 ３可用于运载药物（作为运载对应疾病的药物的 “生物导弹“。） 　　　“生物导弹”＝单克隆抗体＋药物 细胞 骨髓瘤细胞 细胞融合 浆 筛选 瘤细胞 杂交 细胞培养 选出能产生特定抗体的细胞群继续培养 体外培养 体内培养 从培养液或小鼠腹水中取出 单克隆抗体 植物体细胞杂交、动物细胞融合的比较 四.细胞工程比较 主要用于制备 单克隆抗体 获得杂种