基因实际操作主要技术应用基本原理.pptVIP

第五节 基因的化学合成;1977年,坂仓等人首先合成了生长激素释放抑制因子的基因，并使之在大肠杆菌中实现了表达，得到了在大肠杆菌中原来并不存在的活性肽（十四肽）。 1979年，Khorana在Science杂志上发表题为“一个基因的合成”的论文，报道了基因化学合成的成功事例。 1981年中国生化学家王德宝等完成了酵母丙氨酸转移核糖核酸的全合成工作，这是第一个人工合成的具有全部生物活性的RNA分子。;概念： 以核苷或单核苷酸为原料并且不依靠任何天然模板或引物，采用有机合成反应或酶促合成???应进行的寡核苷酸或核酸大分子的合成。 　　;核酸合成包括化学合成和酶促合成两个方面;基本原理是将一个5’端带有适当保护基的脱氧单核苷酸与另一个3’端带有适当保护基的脱氧单核苷酸偶联起来，形成一个带有磷酸二酯键的脱氧二核苷酸分子。;由于以上反应是通过磷酸单酯和羟基缩合生成3′-5′磷酸二酯，故称为磷酸二酯（合成）法。 能合成长达200bp的寡核苷酸片段 但在磷酸二酯法中，由于产物为磷酸二酯，磷酸上所剩下的OH基团，虽然化学活性较小,但也能发生反应,因此,当合成的寡核苷酸链逐渐增长时,由这个磷酸OH基团所带来的副反应也愈益严重，使合成产率急剧下降，目前这个方法已基本上被淘汰。;改进的办法之一是采用适当的保护基把磷酸上的OH基团也保护起来，再进行连接反应。即如图4 所表示的那样，用甲核苷3′-磷酸