【大学实验】植物组织中超氧物歧化酶活性的测定.pptVIP

植物组织中超氧物歧化酶活性的测定 一、实验目的 掌握SOD酶活性测定方法。 掌握分光光度计、光照培养箱、冷冻离心机使用方法。 二、实验原理 因此光还原反应后，反应液蓝色愈深说明酶活性愈低，反之酶活性愈高。 本实验依据超氧物歧化酶抑制氮蓝四唑（NBT）在光下的还原作用来确定酶活性大小。 核黄素 被氧化物质 还原的核黄素 氧 氮蓝四唑 蓝色的化合物 （560nm） 2 + 2H+ H2O2 + O2 SOD 三、实验材料 绿豆芽下胚轴 四、 实验步骤 试 剂（酶） 用量(ml) 终浓度（比色时） 0.05mol/L磷酸缓冲液 130mmol/L Met溶液 750μmol/L NBT溶液 100μmol/L EDTA-Na2液 20μmol/L核黄素 酶液 蒸馏水 3 0.6 0.6 0.6 0.6 0.2 0.4 13mmol 75μmol 10μmol 2.0μmol 对照管加缓冲液代替酶液 总体积 6.0 1、酶液提取 2、显色反应 表1 各溶液加入量 3、SOD活性测定 五、实验结果计算 SOD总活性 = 单位：酶单位/g鲜重表示； Ack―照光对照管的光密度值； AE—样品管的光密度值； V—样液总体积（ml）； a—测定时样品用量（ml）； W—样重（g）； 六、思考题 1、在SOD