霉菌和酵母菌检测.pdf

霉菌和酵母菌检测 1 设备和材料 除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下： 1.1 冰箱： 2℃～5℃。 1.2 恒温培养箱： 28℃±1℃。 1.3 均质器。 1.4 恒温振荡器。 1.5 显微镜： 10×～100×。 1.6 电子天平：感量 0.1g。 1.7 无菌锥形瓶 :容量 500ml 、250ml 。 1.8 无菌广口瓶： 500ml 。 1.9 无菌吸管： 1ml(具0.01ml刻度 ) 、10ml(具0.1ml刻度 )。 1.10 无菌平皿：直径 90mm 。 1.11 无菌试管： 10mm×75mm。 1.12 无菌牛皮纸袋、塑料袋。 2 培养基和试剂 2.1 马铃薯 -葡萄糖 -琼脂培养基：见附录 A 中 A.1 。 2.2 孟加拉红培养基：见附录 A 中 A.2 。 3 操作方法 3.1 试验前准备 3.1.1 将供试品及所有已灭菌的平皿、 锥形瓶、匀浆杯、试管、量筒、吸管 （1ml、10ml）、 稀释剂等移至操作室内。准备好足够用量，避免操作中出入操作间。 3.1.2 开启无菌室紫外杀菌灯和洁净工作台的空气过滤装置 30min 。 3.1.3 操作人员用肥皂洗手，关闭紫外杀菌灯，进入缓冲间，换工作鞋，用消毒液洗手 或用乙醇棉球擦手，穿戴好无菌衣、帽、口罩、手套等。 3.1.4 操作前先用乙醇棉球擦手、工作台面，再用乙醇棉球擦拭供试品瓶、盒、袋等的 开口处周围，待干后用灭菌剪刀或镊子将供试品启封。 3.2 样品稀释液的制备 根据供试品的理化特性与生物学特性，采取适宜的方法制备样品稀释液。样品稀释 液制备若需用水浴加温时， 温度不应超过 45℃。样品稀释液从制备至加入检验用培养基， 不得超过 1 小时。 3.2.1 固体和半固体样品 称取25g样品至盛有 225ml灭菌蒸馏水的锥形瓶中，充分振摇，即为 1:10稀释液。或 放入盛有 225ml无菌蒸馏水的均质袋中，用拍击式均质器拍打 2min ，制成 1:10的样品匀 液。 3.2.2 液体样品 以无菌吸管吸取 25ml样品至盛有 225ml无菌蒸馏水的锥形瓶（可在瓶内预置适当数 量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成 1:10的样品匀液。 3.3 霉菌和酵母菌计数 3.3.1 用 1ml无菌吸管或微量移液器吸取 1:10样品匀液 1ml，沿管壁缓慢注于盛有 9ml 稀 释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用 1支无 菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成 1:100的样品匀液。 3.3.2 按3.3.1操作程序，制备 10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用 1次 1ml 无 菌吸管或吸头。 3.3.3 根据对样品污染状况的估计，选择 2个～3个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可 包括原液），在进行 10倍递增稀释时，吸取 1ml样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度做 两个平皿。同时，分别吸取 1ml空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。 3.3.4 及时将 15ml～20ml冷却至 46℃的马铃薯 -葡萄糖 -琼脂培养基或孟加拉红培养基 （可 放置于 46℃ ±1℃恒温水浴箱中保温）倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。 3.4 培养 待琼脂凝固后，将平板翻转， 28℃±1℃培养 5d，观察并记录。 3.5 菌落计数 肉眼观察，必要时可用放大镜，记录各稀释倍数和相应的霉菌和酵母数。以菌落形 成单位（ colony forming units ，CFU ）表示。选取菌落数在 10CFU～ 150CFU的平板，根 据菌落形态分别计数霉菌和酵母数。霉菌蔓延生长覆盖整个平板的可记录为多不可计。 菌落数应采用两个平板的平均数。 3.6 结果与报告 3.6.1 计算