组织切片技术.ppt

组织学切片技术 ; 大多数的生物材料，在自然状态下是不适合显微观察的，也无法看到其内部结构。因为材料较厚，光线不易透过，另外由于细胞内各个结构的折射率相差很小，即使光线可透过，也难以辩明。 组织学技术是教学和科研中常用的方法。组织在经过固定，脱水，透明，包埋等手续后，用切片机切成较薄的切片，再经不同的染色就可以显示不同细胞组织的形态及其中某些化学成份含量的变化，组织切片也便于保存。 组织学标本的制作技术是组织学，胚胎学，生物学、病理学、肿瘤学、法医学及临床诊断学等学科研究观察细胞、组织的生理、病理形态变化的一种主要手段。;组织学技术包括： 组织学制片技术 组织化学技术 荧光组化及免疫组化技术 各种特殊显微技术 电镜组织学技术 组织培养技术等 ;二、组织学制片技术的分类; 即不用切片机，不经切片手续而制成切片的方法，根据材料性质的不同，有不同的处理方法，该类方法操作简单快捷，其中铺片法，封藏法可使原有组织结构不被破坏，涂片法，压片法弥补了用包埋，切片法所不可能观察清楚的不足，因此是组织标本制备中常用的手段。 ;1.1 涂片法 主要用于血液、精液、尿液、痰液、微生物等不能切片的液态颗粒性材料，可在载玻片上涂成单层细胞，再经固定，脱水，染色等手段制成永久标本。 1.2 铺片法 主要用于动、植物组织的表皮层观察，可活体取待观察组织，用尖镊子迅速将组织平铺在载玻片上。如: 疏松结缔组织铺片标本的制备。;1.3 压片法 一些较幼嫩，柔软的材料可将其置载玻片上，用小解剖刀将其分散，加染料一滴，再盖上盖玻片，用拇指垂直用力挤压，使组织散成一薄片，再进行观察，如骨骼肌运动终版的制备。 1.4 磨片(Ground section) 用于很坚硬的组织，如骨和牙。;血涂片;;疏松结缔组织铺片;铺片; 切片法是必须依靠切片机将组织切成薄片来进行观察的方法。为了能清晰地观察到组织结构及细胞形态，必须先经过一系列步骤将组织内渗入某些支持物质，使组织变硬以利于切成薄片，根据所用支持剂的种类不同，主要分为???蜡切片法，火棉胶切法，冰冻切片法等类型，切成薄片后还需要脱蜡，染色，脱水，透明等步骤，将其制成永久标本。 ;石蜡切片是最基本的切片技术，冰冻切片和超薄切片等都是在石蜡切片基础上发展起来的。现以石蜡切片为例，介绍切片标本的制备方法。 ;组织学制片步骤：; 根据不同的实验目的，选择相应的材料，材料要求新鲜、准确、完整，材料要避免挤压、挫伤、干枯。 所采集材料应立即放入固定剂，并编号，注明采集时间、地点、名称、组织部位，所取组织块要大小适当，即要能说明问题，又要考虑固定剂的穿透能力。 一般组织学取材稍大，细胞学取材稍小，动物组织取材要稍大，植物组织取材稍小。 ; 手术切除标本，各种活检穿刺标本和尸体解剖标本。 手术切除标本的取材： 病灶在组织中的分布常存在不均一性，取材要有代表性，取材部位要兼顾：主要病灶，病灶与正常组织交界处，远离病灶的正常组织。 组织大小：长1cm×宽1cm×厚0.2～0.3cm。 各种组织的活检取材： 活检取材体积小，取材困难，不易取到主要病灶，因此对标本的处理应特别慎重，及时固定，包埋时要平整。;2.1.2 动物组织标本的取材; 动物的选择; 动物的处死;2.1.3 组织取材注意事项;4.取材应注意清洁，组织块上如有血液、污物和粘液沾着，应用生理盐水洗涤后再入固定液。 5.取材时间：原则上，应尽快取材，但比较大的手术标本如胃、肺、肠等器官，最好先固定后取材。 6.注意确定取材部位和包埋切面的方向，切除不需要的部分。 7.明确编号，登记;新鲜的组织被割取后,由于细胞内酶的作用和细菌的繁殖，可引起组织的自溶和腐败。因此，割取组织块后，应立即采用一种方法，将组织尽可能保持原有的形态结构，且有利于保存和适于制片的操作，这一步骤称为固定。化学固定法就是用化学试剂配制成固定液使组织固定。 固定是制片极为关键的一个步骤，制片质量的优劣，除与材料的新鲜程度有关外，还取决于最初的固定是否适当和完全。;① 防止组织自溶和腐败； ② 使细胞内的蛋白质、糖、脂肪等各种成分沉淀保存下来从而保存细胞的各种组成成分使其保持与生活时相近似的形态和结构； ③ 因沉淀及凝固的关系，使细胞内不同的成分产生不同的折光率，造成光学上的差别使原来在生活情况下看不清楚的结构变得清晰易见，且有的固定剂还有助染作用(如醋酸、苦味酸)，从而使细胞各部易于染色； ④ 固定剂还兼有硬化作用，使柔软组织硬化而不易变形，有利于操作。 ;（1）小块组织固定：从人体或