多糖结构解析的方法.pdfVIP

多糖结构解析的方法 一类是传统的化学方法，一类是波谱学方法。 2.1 化学方法 化学方法是用来对一些简单的单糖、 二糖和寡糖进行分析的经典方法， 同时亦可 应用在多糖的结构解析上。 它是通过完全酸水解、 部分酸水解、高碘酸氧化、Smith 降解、甲基化分析和气质联用对多糖进行解析的。 2.1.1 水解法 水解法通过完全水解将多糖链分解成单糖，这是分析多糖链组成成分的主要手 段。水解法包括完全酸水解、部分酸水解、乙酰解和甲醇解等。 水解后的多糖经过中和、过滤可采用气相色谱、纸层析、薄层层析、高效液相色 谱仪 [8] 和离子色谱法 [9] 进行分析。 2.1.2 高碘酸氧化法 高碘酸可以选择性的氧化断裂糖分子中的连二羟基或连三羟基处， 生成相应的多 糖醛、甲酸，反应定量进行，每裂开一个 C—C 键消耗一分子高碘酸，通过测定 高碘酸消耗量及甲酸的释放量， 可以判断糖苷键的位置、 直链多糖的聚合度和支 链多糖的分枝数 [10] 。 2.1.3 Smith 降解 Smith 降解是将高碘酸氧化产物还原后进行酸水解或部分水解。 由于糖残基之间 以不同的位置缩合， 用高碘酸氧化后则生成不同的产物。 根据降解产物可以推断 糖苷键的位置。在降解产物中若有赤藓糖生成，则提示多糖具有 1→4 结合的糖 苷键；若有甘油生成，则提示有 1→6、1→2 结合的糖苷键或有还原末端葡萄糖 残基；若能检出单糖，如葡萄糖、半乳糖、甘露糖等 , 则有 1→3 糖苷键结合的存 在 [11] 。 2.1.4 甲基化反应 甲基化反应是用甲基化试剂将各种单糖残基中的游离羟基全部甲基化， 进而将甲 基化多糖水解后得到的化合物， 其羟基所在的位置即为原来单糖残基的连接的位 置。甲基化反应的关键在于甲基化是否完全，通常采用红外光谱法检测 3500 ㎝ -1 处有无吸收峰 , 以此来判断甲基化多糖中是否含有游离的羟基 (-OH) 。甲基化 的方法有 Purdie 法、 Hamorth 法、 Menzies 法和 Hakomori 法等 [12] 。现在使用 1 较多的是 Ciucanu 和 Kerek[13] 方法 , 它是将多糖样品溶解在 DMSO中, 加入 NaOH 粉末和碘甲烷，混合在密封瓶中 25℃搅拌 6min 即可 , 方法简单 , 重复性好。 2.2 波谱学方法 食（药）用菌多糖由于结构比较复杂，仅用传统的化学方法完全解析多糖结 构是十分困难的，必须利用波谱学知识进行解析。在食（药）用菌多糖中常用的 波谱学方法有紫外分光光度计法、红外光谱法和核磁共振法。 2.2.1 紫外分光光度计法 用苯酚硫酸法（ 490nm）进行多糖的含量测定 ;280nm 处有无吸收峰来检测是 否含有蛋白质和在 260nm处有无吸收峰来判断是否含有核酸 ; 在 620nm处有无吸 收峰来判断有无色素 [14]; 在 206nm处有无吸收峰来判断是否含有多糖 [15] 。 2.2.2 红外光谱法 红外光谱分析多糖结构，可以鉴定多糖的构型，如： α 构型多糖常出现 844±8cm-1 峰 , 而 β 构型多糖出现 891±7cm-1 峰。糖键上主要取代基的特征 谱为分子间、内氢键使糖羟基在