克隆载体的特征及类型 (2).pptVIP

第三十一页，共57页 质粒 重要的大肠杆菌质粒载体 pGEM-3Z： 多拷贝 装有两个噬菌体的强启动子 装有多克隆位点（MCS） 正选择颜色标记 lacZ’ 用于外源基因的高效表达 注意：T7和SP6启动子特异性地由噬菌体DNA编码的RNA聚合 2743 bp MCS lacZ’ PT7 ori Apr pGEM-3E PSP6 酶所识别，因此相应的受体菌必须表达噬菌体RNA聚合酶，如： E.coli BL21（DE3）等 第三十二页，共57页 在重组的pGEM3Z载体中加入相应的RNA聚合酶，可以发生外源基因转录。 第三十三页，共57页 质粒载体总体评价 操作简便 克隆容量有限（ 10kb） 第三十四页，共57页 第二节 噬菌体或病毒DNA 噬菌体或病毒是一类非细胞微生物，能高效率高特异性地侵染 宿主细胞，然后或自主复制繁殖，或整合入宿主基因组中潜伏 起来。 高效率的感染性能使外源基因高效导入受体细胞 自主复制繁殖性能使外源基因在受体细胞中高效扩增 第三十五页，共57页 噬菌体或病毒DNA 大肠杆菌的 l 噬菌体DNA l 噬菌体的生物学特性： 生物结构 l 噬菌体由外壳包装蛋白和l-DNA组成 l-DNA全长48502个核苷酸 l-DNA上至少有61个基因 约有20kb的区域为为噬菌体生长非必需的，可以缺失或被外源DNA片段所取代。 第三十六页，共57页 l 噬菌体生物学