克隆动物培育技术.pptVIP

2、受体细胞的准备 受体细胞有3类：卵母细胞、原核期受精卵和2细胞期胚胎细胞。 获得卵母细胞多采用活体超排的方法。 卵母细胞的去核目前多采用显微操作法，即在显微镜下用外径为20μm的微细玻璃管吸管吸取细胞核。常用的去核方法有盲吸法、半卵法和功能去核法等。 第三十页，共51页 3、核移植 在显微操作仪下将供体细胞核移入受体细胞中。根据供体移入到受体细胞的不同部位，可以分为带下（透明带下）注射和细胞质内注射。 第三十一页，共51页 4、核质融合及卵母细胞质的激活 核质融合的方法有： (1)病毒融合法 如将仙台病毒与供体核一起注入去核的受精卵中，促进细胞融合。 (2)电融合法 将重构胚置于电场下，以电脉冲促进融合。 (3)Honolulu技术 利用吸液管将遗传物质取出，然后注入卵细胞中。以机械和化学激活方式促使重构胚的融合。 第三十二页，共51页 5、重构胚的培养和移植 一种是体外培养，在适当的培养条件下培养到一定时期，然后进行胚胎移植。 另一种方法是采用中间受体培养，在核质融合后，将重构胚用琼脂糖包埋，移入动物的输卵管或子宫，发育到桑椹胚或囊胚后，再重新移入假孕受体子宫。 第三十三页，共51页 6、重复克隆(连续核移植) 如有必要，将核移植胚胎培养至桑椹胚或囊胚后继续做核供体重复克隆，可以显著提高克隆成活率。 第三十四页，共51页 7、克隆动物的鉴