几种常见染料教学内容.pdfVIP

如有侵权请联系网站删除 几种常用的染料 1. Calcein [kælse n] ：钙黄绿素 （活菌染色） Calcein-AM 是一种可对活细胞进行荧光标记的细胞染色试剂，Calcein-AM 由于在Calcein(钙黄绿素) 的基础上加强了疏水性，因此能够轻易穿透活细胞膜。 当其进入到细胞质后，酯酶会将其水解为 Calcein(钙黄绿素)留在细胞内,发出强 绿色荧光。与其它同类试剂（如BCECF-AM 和Carboxy-fluorescein diacetate ）相 比，Calcein-AM 是最适合作为荧光探针去染活细胞的，因为它的细胞毒性很低。 Calcein(钙黄绿素)不会抑制任何的细胞功能如增殖或淋巴球的趋化性。另外，使 51 用了 Calcein(钙黄绿素) 的活性检测的实验结果是十分可信并且与标准的 Cr-释 放法所得结果相一致的。Calcein(钙黄绿素) 的激发和发射波长分别为490 nm 和 515 nm 。 Calcein-AM和碘化丙啶（PI）溶液，它们分别可对活细胞和死细胞染色。 Calcein-AM 的乙酸甲基酯亲脂性很高，使其可透过细胞膜，通过活细胞内的酯 酶作用，Calcein-AM 能脱去AM 基，产生的Calcein(钙黄绿素)能发出强绿色荧 光，因此Calcein-AM 仅对活细胞染色。另一方面，作为核染色染料的PI不能穿 过活细胞的细胞膜。它穿过死细胞膜的无序区域而到达细胞核，并嵌入细胞的 DNA双螺旋从而产生红色荧光 （激发：535 nm，发射：617 nm ），因此PI 仅对 死细胞染色。由于Calcein(钙黄绿素)和PI-DNA 都可被490 nm 激发，因此可用 荧光显微镜同时观察活细胞和死 细胞。用545 nm 激发，仅可观察 到死细胞。根据以上特点， Calcein-AM 和碘化丙啶（PI ）经 常被结合用来作为活细胞和死细 胞的双重染色。 由于不同细胞系的最佳染色 条件不同，我们建议个别确定 Calcein-AM 和PI 的合适浓度。 精品资料 如有侵权请联系网站删除 2. PI：碘化丙啶（只对死细胞进行染色，只结合死菌，使死菌无法扩增） 荧光染料PI （碘化丙啶）是一种可对DNA 染色的细胞核染色试剂，常用于 细胞凋亡检测，英文全称是Propidium Iodide 。它是一种溴化乙啶的类似物，在 嵌入双链DNA 后释放红色荧光。尽管PI 不能通过活细胞膜，但却能穿过破损的 细胞膜而对核染色。 PI 经 常被 用 来 与 Calcein-AM 或者FDA 等荧光探针一起使 用，能同时对活细胞 和 死 细 胞 染 色 。 PI-DNA 复合物的激 发和发射波长分别为 535 nm 和615 nm 。 3. PMA （只对死细胞进行染色，只结合死菌，使死菌无法扩增） PMA(propidium monoazide) ，叠氮溴化丙锭，PMA?是一款具有高亲和力的 光敏反应 DNA 结合染料。染料自身的荧光非常微弱， 但是结合核酸后荧光信 号很强。PMA 倾向于结合dsDNA，PMA 上的叠氮基团生成高反应性的nitrene 基，很容易的在结合部位与碳氢化合物部分地结合生成稳定牢固的共价氮碳键， 从而形成稳定的DNA 修饰。PMA 完全不能通透细胞膜，因此它只能选择性的 饰死细胞“暴露”的DNA(细胞壁和细胞膜已破损的细胞) 。这一特性使得它可以 和定量RT-PCR 联合使用，进行选择性的扩增活细胞DNA ，不扩增死细胞DNA 。 例如，许多细菌在不良环境下能进入活的非可培养状态 （Viable but nonculturable state, VBNC ）。细菌培养技术常常造成 VBNC 状态的细菌漏检，利用 EMA （Ethidium Monoazide Bromide ）或者PMA （propidium monoazide ）联合PCR 技 术选择性抑制细菌死细胞扩增，该方法结合了EMA （PMA ）选择渗透性和PCR 特异性，作为一种区分细胞死活的方法，可以有效检测细菌VBNC 细胞。 4. EMA （只对死细胞进行染色，只结合死菌