基因修饰在人源化肝脏小鼠建模中的应用医学课件.pptx

基因修饰技术在人源化肝脏小鼠模型中的应用 早在17世纪动物试验就已经出现了。目前试验动物广泛应用于生理学、医学、药学等学科的教学与研究，以及食品、化妆品、生物制品、工业产品等的安全性、毒性和效力等方面的试验和检测，具有重要价值和作用。 试验用动物 种属差异 动物基因组 人类基因组 代谢、免疫相关人类毒性 肝脏是人体最重要的代谢器官，也是出现受试人员中毒时最常见、表现最明显、影响最严重的毒性靶器官。另据报导，每年临床发生肝毒性损伤的病例亦非常多。药物引发肝损伤占全部中毒事件20%－50%，暴发性肝衰竭可达15%－30%。 药物性肝损害 非阿尿苷事件回顾 非阿尿苷是抗乙肝病毒核苷类似物，其前期试验药效显著，结果良好。而1993年15名受试者加大剂量（0.1 or 0.25 mg/kg/d)）的二期临床试验中，前8周疗效明显，而13周时7名受试者出现肝衰竭、脾衰竭、乳酸中毒，其中5名不治身亡。 动物试验非阿尿苷最大耐受剂量 小鼠 50mg/kg/d 90d 大鼠 500mg/kg/d 30d 比格犬 3mg/kd/d 90d 食蟹猴 25mg/kg/d 30d 小鼠给药剂量达到250mg/kg/d（人类剂量1000倍）时，50只小鼠仅有4只死于肾衰竭。大鼠剂量达510mg/kg/d （人类剂量2000倍），持续给药70d，所有大鼠ALT、AST均正常。 毒性 预测 食品 生物制品 化妆品 药物 试验动物作为预测工具如不能完全准确预测人体可能会出现的情况，就如同战地扫雷，一旦出现误判，代价很有可能将是巨大的！ 危险 安全 那么能不能构建一种临床前更贴近人肝代谢、预测性更一致性的试验动物模型，将可能发生的人类肝毒性提前筛查出来，降低无谓成本，减少临床损失呢？这将具有极其重大的意义和价值！ 人源化肝脏小鼠模型由此成为研究热点 分子 技术 生物 模型 临床 应用 现代生物医药领域研究模式 基因修饰技术 ES打靶基因修饰技术 TALEN基因修饰技术 CRISPR/Cas9基因修饰技术 TetraOneTM基因修饰技术 基因修饰动物建模 免疫缺陷小鼠模型的构建 类 别 序号 名 称 基 因 信 息 特异性免疫 非特异性免疫 免 疫缺 陷小 鼠 1 Nude Foxn1nu 无胸腺，无T，B↓ 正常 2 SCID Prkdcscid 无T，无B 正常 3 NOD-SCID NOD/Prkdcscid 无T，无B NK↓补体↓ 4 Rag2 Rag2-/- T、B功能缺失 正常 5 IL2RG Il2rg-/- T、B部分功能缺失 NK↓ 6 F344RG Rag2-/-/Il2rg-/- T、B功能缺失 NK功能缺失 7 FPG Prkdc-/-/Il2rg-/- T、B功能缺失 NK功能缺失 8 NOG NOD/Prkdcscid/Il2rgtm1Sug 无T，无B NK、补体功能缺失 人源化肝脏小鼠模型的构建 工程基因片段 uPA基因片段 Fah基因片段 HSVtk/GCV自杀系统 Tet-on/uPA自杀系统 其他 移植用人类细胞 肝细胞 造血干细胞 胸腺细胞 其他 （1）uPA-Rag2小鼠（Dandri，2001年，德国） uPA全称尿激酶纤维蛋白溶酶原活化子（Urokinase-type Plasminogen Activator），当白蛋白启动的uPA基因片段在小鼠肝细胞内表达时，纤维蛋白溶酶原会激活纤维蛋白酶，诱发粗面内质网发生裂解损伤，最后肝细胞损伤并逐渐消亡。 Rag2全称重组激活基因2（Recombination-Activating Gene2），在VDJ基因重排和淋巴细胞发育中起关键性作用。Rag2-/-小鼠为C57BL/6J品系背景，T、B淋巴细胞早期发育严重停滞，外周血没有成熟的循环T、B淋巴细胞，非特异性免疫收影响小。 Rag2小鼠 uPA基因 肝细胞人源化率仅有15%，适合病毒学研究，但无法满足代谢研究需求！！ （2）uPA-SCID小鼠（Tateno，2004年，日本） SCID小鼠全名联合缺陷免疫小鼠 （severe combined immune deficiency）， 其第16对染色体隐性基因突变，纯合子的 淋巴细胞抗原受体基因VDJ区域的重组酶活性异常，基因重排无法正常进行，影响B、T细胞的正常分化，外周血白细胞总数减少，