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免疫细胞化学常用试剂介绍 一、固定剂 大多数神经激素、肽类物质为水溶性，在用于免疫细胞化学研究之前，常需固定。但肽类和蛋白质的 物理、化学性质不同，因而对不同的固定方法或固定剂的反应也不尽相同。某些固定剂甚至可同时破坏和 / 或保护同一抗原的不同抗原决定簇。因此，在进行免疫细胞化学研究之前，很有必要了解所要研究的物质 （蛋白质或肽类）的化学性质，并根据需要来选择适宜的固定剂（或固定方法）以及改进固定条件。 目前，免疫细胞化学研究中常用的固定剂仍为醛类固定剂，其中以甲醛类和戊二醛最为常用。在此， 简要介绍几种目前较为常用和推荐的固定剂，以供读者选用。 1.4% 多聚甲醛 -0.1mol/L 磷酸缓冲液（ pH7.3 ） 试剂：多聚甲醛 40g 0.1mol/L 磷酸缓冲液 至 1000ml 配制方法： 称取 40g 多聚甲醛， 置于三角烧瓶中， 加入 500 ～ 800ml 0.1mol/L 磷酸缓冲液 （Phosphate Buffer 以下简称 PB），加热至 60 ℃左右，持续搅拌（或磁力搅拌）使粉末完全溶解，通常需滴加少许 1n NaOH 才能使溶液清亮，最后补足 0.1mol/L 的 PB 于 1000ml ，充分混匀。 该固定剂较适于光镜免疫细胞化学研究， 最好是动物经灌注固定取材后， 继续浸泡固定 2 ～24h 。另外， 该固定剂较为温和，适于组织标本的较长期保存。 2.4% 多聚甲醛 -磷酸二氢钠 / 氢氧化钠 试剂： A 液：多聚甲醛 40g 蒸馏水 400ml B 液： Na2HPO4?2H2O 16.88g 蒸馏水 300ml C 液： NaOH 3.86g 蒸馏水 200m 配制方法： A 液最好在 500ml 的三角烧瓶中配制 （方法同前），至多聚甲醛完全溶解后冷却待用。 注意， 在溶解多聚甲醛时，要尽量避免吸入气体或溅入眼内。 B 液和 C 液配制好后，将 B 液倒入 C 液中，混合后 再加入 A 液，以 1n NaOH 或 1N HCl 将 pH 调至 7.2 ～ 7.4 ，最后，补充蒸馏水至 1000ml 充分混合， 4℃冰箱保存备用。 该固定剂适于光镜和电镜免疫细胞化学研究，用于免疫电镜时，最好加入少量新鲜配制的戊二醛，使 其终浓度为 0.5% ～ 1% 。该固定剂较温和，适于组织的长期保存。组织标本于该固定液中， 4 ℃冰箱保存 数月仍可获得满意的染色效果。 3 ．Bouin ’s液及改良 Bouin ’s液 试剂：饱和苦味酸 40% 甲醛 250ml 冰醋酸 50ml 配制方法：先将饱苦味酸过滤，加入甲醛（有沉淀者禁用） ，最后加入冰醋酸，混合后存于 4 ℃冰箱中 备用。冰醋酸最好在临用前加入。改良 Bouin ’s液即不加冰醋酸。 该固定液为组织学、病理学常用固定剂这一，对组织的穿透力较强，固定较好，结构完整。但因偏酸 （pH 为 3～ 3.5 ），对抗原有一定损害， 且组织收缩较明显， 故不适于组织标本的长期保存。 此外， 操作时， 应避免吸入或与皮肤接触。 4 ．Zamboni’s(Stefanini ’液s) 试剂：多聚甲醛 20g 饱和苦味酸 150ml Karasson- Schwlt ’s PB 至 1000ml 配制方法：称取多聚甲醛 20g ，加入饱和苦味酸 150ml ，加热至 60 ℃左右，持续搅拌使充分溶解、过 滤、冷却后，加 Karasson- Schwlt ’s PB 至 1000