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化学发光免疫分析的类型 - 临床医学检验考试 化学发光反应参与的免疫测定分为以下几种类型： （一）化学发光酶免疫测定 化学发光酶免疫测定（ CLEIA ）是采用化学发光剂作为酶反应底 物的酶标记免疫测定。经过酶和发光两级放大，具有很高的灵敏度。 以过氧化物酶为标记酶、 以鲁米诺为发光底物、 并加入发光增强剂以 提高敏感度和发光稳定性。 应用的标记酶也可以为碱性磷酸酶， 发光 底物为 dioxetane 磷酸酯，固相载体为磁性微粒。 （二）化学发光免疫测定 化学发光免疫测定（ CLIA ），是用化学发光剂直接标记抗原或抗 体的一类免疫测定方法。 吖啶酯是较为理想的发光底物， 在碱性环境 中即可被过氧化氢氧化而发光。 用作标记的化学发光剂应符合以下几个条件： 1.能参与化学发光反应医学 `教育网搜集整理。 2.与抗原或抗体偶联后能形成稳定的结合物试剂。 3.偶联后仍保留高的量子效应和反应动力。 4.应不改变或极少改变被标记物的理化特性，特别是免疫活性。 鲁米诺类和吖啶酯类发光剂等均是常用的标记发光剂。 （三）微粒子化学发光免疫分析 该免疫分析技术有两种方法：一是小分子抗原物质的测定采用竞 争法；医学 |教育网搜集整理二是大分子的抗原物质测定采用双抗体 夹心法。该仪器所用固相磁粉颗粒极微小，其直径仅 1.0 μm，这样大 大增加了包被表面积，增加抗原或抗体的吸附量，使反应速度加快， 也使清洗和分离更简便。其反应基本过程：（ 1）竞争反应：用过量 包被磁颗粒的抗体， 与待测的抗原和定量的标记吖啶酯抗原同时加入 反应杯温育， 其免疫反应的结合形式有两种， 一是标记抗原与抗体结 合成复合物； 二是测定抗原与抗体的结合形式。 （2）双抗体夹心法： 标记抗体与被测抗原同时与包被抗体结合成一种反应形式， 即包被抗 体-测定抗原 -发光抗体的复合物。 （四）电化学发光免疫测定 电化学发光免疫测定 （ECLI ）是一种在电极表面由电化学引发的 特异性发光反应， 包括电化学和化学发光两个部分。 分析中应用的标 记物为电化学发光的底物三联吡啶钌或其衍生 N-羟基琥珀酰胺 （NHS ）酯，可通过化学反应与抗体或不同化学结构抗原分子结合， 制成标记的抗体或抗原。 ECLL 的测定模式与 ELISA 相似。其基本原 理是发光底物二价的三联吡啶钉及反应参与物三丙胺在电极表面失 + 去电子而被氧化。氧化的三丙胺失去一个 H 而成为强还原剂，将氧 化型的三价钌还原为激发态的二价钌， 随即释放光子而恢复为基态的 发光底物。 这一过程在电极表面周而复始地进行， 不断地发出光子而 常保持底物浓度的恒定。