电泳技术医学知识.ppt

电泳技术医学知识;第一节 概述;一、电泳技术概念;二、电泳技术分类;;;;;;三、电泳技术特点;第二节 电泳技术基础原理;一、电泳迁移率;;表2-1 血清蛋白等电点与电泳迁移率;;二 、影响电泳迁移率原因;;;;1．缓冲液化学组成（缓冲溶质） 缓冲体系组成常选择弱酸/弱酸盐、酸式盐/次级盐。对缓冲液要求是化学性质稳定、电导率低、缓冲容量大、粒子移动性好。按此要求, 缓冲液pH值确定后, 第一, 选择缓冲液时要尽可能选择pKa靠近缓冲液pH弱酸成份, 此时缓冲容量最大。第二, 优先选择离子价数为1价电解质, 目是保持离子活度。第三, 优先选择正、负离子移动速度相近电解质, 使电泳时离子分布均匀, 确保电泳区带整齐。;;2．pH值 溶液pH值决定了带电颗粒解离程度, 也决定了物质所带净电荷多少。 如缓冲溶液pH值大于待分离蛋白质等电点pI, 则蛋白质带负电荷, 在电场中向正极移动。 当分离某一蛋白质混合物时, 应选择一个能扩大多种蛋白质所带电荷量差异pH值, 以利于多种蛋白质分离, 当然不能过酸过碱, 以免引发蛋白质变性。缓冲液pH值通常设在4.5～9.0为宜。;;例: 求0.015M Na2SO4溶液离子强度: I=（0.015×2×12+0.015×22）/2=0.045（mol/L） 缓冲液离子强度影响缓冲容量、产热效应和电泳速度。离子强度大, 缓冲容量大, pH值稳定; 但离子强度大, 电泳速度慢; 同时离子强度大, 电流强度大, 产热多, 蒸发快。速度慢, 会造成时间过长, 标本扩散。速度快, 造成区带不整齐, 分辨率低。综合考虑, 离子强度最好选在0.02～0.2mol/L之间。;（四）支持介质 支持介质对电泳影响关键表现为电渗作用和吸附作用。 1．电渗作用 液体在电场中对于一个固体支持物相对移动, 称为电渗作用。在电泳时应尽可能避免使用含有高电渗作用支持物。 2．吸附作用 支持介质表面对被分离物质含有一定吸附作用, 使被分离样品滞留而降低电泳速度, 造成样品拖尾, 使电泳分辨率降低。电泳时, 要选择吸附作用小支持介质。;;第三节 电泳仪;一、电源;二、电泳槽;;第四节 多个常见电泳技术;一、醋酸纤维素薄膜电泳;（一）优点;（二）缺点;【试验名称】醋酸纤维素薄膜电泳分离血浆蛋白质 【试验原理】 血浆中多种蛋白质等电点不一样, 通常都低于pH7.4。它们在pH8.6缓冲液中均解离带负电荷, 在电场中向正极移动。因为血浆中多种蛋白质分子大小、形状及所带电荷量不一样, 所以在醋酸纤维素薄膜上电泳速度也不一样。所以能够将它们分离为清蛋白（Albumin)、α1-球蛋白、α2-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白, 纤维蛋白原６条区带。;（三）操作步骤;操作步骤;操作步骤;操作步骤;操作步骤;操作步骤;操作步骤;操作步骤;操作步骤;操作步骤;操作步骤;血清蛋白电泳 ;（五）应用;;二、琼脂糖凝胶电泳;三、聚丙烯酰胺凝胶电泳;;（一）聚丙烯酰胺凝胶电泳优点;;（二）聚丙烯酰胺凝胶聚合;;;;（三）聚丙烯酰胺凝胶孔径和机械强度调整;;;（四）不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳;;表2-2 血清蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳条件;;（五）操作步骤;四、等电聚焦电泳（了解）;五、双向电泳;双向凝胶电泳仪;