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输液系统 流动相在转入贮液器前必须过滤和脱气 梯度洗脱装置：将两种或两种以上的不同极性的溶剂进行混合，作为流动相使用。 进样系统 手动六通进样阀：10、20、50、100μL定量环 自动进样器 第三十一页，共46页 分离系统——色谱仪的核心部分 保护柱起到保护分析柱作用，固体微粒、污染物首先被保护住挡住。 检测系统 将物理或化学特性转变为可处理的电信号 控制和数据处理系统 由计算机和数据处理软件组成 第三十二页，共46页 HPLC常用检测器 紫外-可见光检测器（UV-VIS） 浓度型的选择性检测器 液相色谱应用最广泛的检测器 具有紫外吸收能力的物质 缺点：对紫外无吸收的物质无响应，对紫外有吸收的溶剂（如苯）不能用作流动相。 第三十三页，共46页 农药残留测定方法 第一页，共46页 第二页，共46页 5.1 气相色谱法 第三页，共46页 第四页，共46页 （1）气相色谱法基本术语 色谱图：响应信号—时间or响应信号—载气流出体积 基线：仅载气通过时检测器所产生的响应信号曲线 色谱峰：色谱柱流出组分通过检测器时所产生的响应信号曲线 峰底：峰起点与终点之间连接的直线 峰高：色谱峰最高点到峰底的距离 峰宽：峰两侧拐点处所作切线与峰底相交两点间的距离 半高峰宽：峰高的中点作平行于峰底的直线，此直线与峰两侧相交两点间的距离 峰面积（A）：峰与峰底之间的面积 第五页，共46页 （1）气相色谱法基本术语 死时间tr0：不被固定相吸附或溶解的组分（如空气）从进样到出现峰最大值之间的时间。 保留时间tr：组分从进样到出现峰最大值时所经过的时间。 调整保留时间tr ：某组分的保留时间扣除死时间。 tr= tr - tr0 相对保留值α：两组分调整保留时间的比值，通常作为衡量固定相选择性的指标，又称选择因子。 第六页，共46页 例题 由以上气相色谱图及数据，求组分1和2的调整保留时间tr1和 tr2，并计算选择因子α 的值。 第七页，共46页 （2）气相色谱法的分配原理 气相色谱分析的关键是物质的分离问题。怎样实现两物质色谱峰的完全分离？ 第八页，共46页 分配系数K 分配比k，又称为容量因子，组分在两相间分配平衡时，固定相和流动相中的组分的质量比，即 （2）气相色谱法的分配原理 第九页，共46页 ①塔板理论的假设 在柱内一小段长度H内，组分可以在两相间迅速达到平衡，这一小段柱长称为理论塔板高度H； 载气进入色谱柱不是连续进行的，而是脉动式，每次进气为一个塔板体积； 所有组分开始时都集中于0号板上，而且组分的纵向扩散可忽略； 分配系数在所有塔板上是常数，与组分在某一塔板上的量无关。 （3）塔板理论 第十页，共46页 第十一页，共46页 在N为8和9时，组分从具有5块塔板的柱中洗脱出来达到最大浓度。流出曲线呈峰形，由于柱子的塔板数太少，峰形不对称。当塔板数n50时，就可以得到对称的峰形曲线。在GC中，一般n值很大，约103~106，因而流出曲线可趋于正态分布。 第十二页，共46页 ②理论塔板数 塔板理论 n越大或H越小，则柱效越高。 第十三页，共46页 ③理论塔板数与选择因子、分离度的关系 选择因子α是固定液对两个相邻组分的调整保留时间之比。 α越大，两组分越易分离。柱温降低， α增大，有利于分离和柱效率的提高。 分离度R定义为两个相邻组分的保留值之差与其平均峰宽值之比。R值越大，分离越好。R=1时，两峰重叠约2%。通常降低柱温，增加柱长，使两峰间距增大，R提高，但又会使峰加宽，因此需进行最优化选择。 （3）塔板理论 第十四页，共46页 ③理论塔板数与选择因子、分离度的关系 理论塔板数n与选择因子α 、分离度R的关系： （3）塔板理论 第十五页，共46页 范弟姆特（Van Deemter）速率理论： 塔板高度H-载气线速度u关系 H = A + B/u + Cu （4）速率理论及影响柱效率的因素 涡流扩散项 分子扩散项 传质阻力项 第十六页，共46页 柱长：柱长↑可使理论塔板数n ↑，但峰宽↑，分析时间↑。 柱径：柱径小利于减少组分在柱内的分子扩散，提高柱效，但柱径太小不利操作。填充柱的柱内径2~3mm为宜。 载气及流速： H = A + B/u + Cu 柱温：需综合考虑。农药多残留等多组分的分析通常采用程序升温的办法解决。 担体：粒度细小、装填均匀有利于减小涡流扩散项、提高柱效。一般粒度直径为柱内径的1/20~1/25为宜。 气化温度：应高于各组分最高沸点，保证瞬间气化。 样品进样量：不宜过大，进样量超过柱负荷，会降低柱效，色谱峰变宽。 （5）操作条件的选择 第十七页，共46页 GC检测器 检测器是测量柱