灭活剂和佐剂wang.pptxVIP

1;第一节 灭活剂;（一）什么是灭活？;生物制品意义上灭活的含义：是利用物理或化学的方法，破坏微生物的生物学活性，破坏病原微生物的繁殖能力和致病能力，但仍然保留反应原性和免疫原性的过程。 ;（二）灭活的类型;1、物理灭活;2、化学灭活;（三）灭活剂; 是最古典、使用最广泛的灭活剂 《兽医生物制品制造及检验规程》（2000）中的26种灭活疫苗，均以甲醛作为灭火剂。 ;甲醛的水溶液——福尔马林 (含甲醛36~40%) 灭活机理：还原作用;灭活浓度：需氧细菌％～％，厌氧细菌％～％，病毒???～％。 灭活原则：低浓度、短时间而又能达到彻底灭活目的。 必要时可在灭活后加入焦亚硫酸钠，以中断其反应。;N-乙酰乙烯亚胺（AEI)、二乙烯亚胺(BEI) 、缩水甘油醛（GDA） 灭活机制： 1. 烷化DNA分子中的鸟嘌呤或腺嘌呤等，引起单链断裂或双螺旋链交联，因改变DNA的结构而破坏其功能，妨碍RNA的合成，从而抑制细胞的有丝分裂。 2. 与酶系统和核蛋白起作用而干扰核酸代谢。;优点：能破坏病毒的核酸芯髓，使病毒完全丧失感染力，而 不损害其蛋白衣壳，保留其保护性抗原。 ;（1）N-乙酰乙烯亚胺（AEI） 淡黄色澄明液体，有轻微氨臭味，能与水或醇任意混合。 0～4℃可保存1年，在-20℃可保存2年。 AEI功能基团是乙烯亚胺基，可用于口蹄疫灭活苗。 口蹄疫病毒液: 终浓度％，30℃8h, 加2％硫代硫酸钠阻断 ;（2）二乙烯亚胺（BEI） 市购商品为％的BEI溶液，在0～4℃可保存1个月; 口蹄疫病毒悬液：终浓度0.02%, 加入2％硫代硫酸钠中断灭活。 ;大肠杆菌、噬菌体、新城疫病毒灭活效果优于甲醛。 本品易挥发，水溶液含量为15～31mg/ml。 0～4℃ 保存3个月后含量渐下降，约半年失效；20℃只能保存10 d。 ;3. 苯酚;4. 结晶紫;5. β-丙内酯;6. 硫柳汞 ;1、灭活剂特异性：如石炭酸对真菌和病毒效果差，但对细菌效果好。结晶紫能杀死多种革兰氏阳性菌和阴性菌，但对绿脓杆菌和细胞芽孢作用弱。 2、微生物种类和特性：;3、灭活剂浓度（一定要适合） 4、灭活温度：通常同一浓度的灭活剂在不同温度的灭活速度与温度成正比，但温度太高，对微生物的抗原性将有不利影响。（具体不同病原体或毒素，其灭活时间和温度不一致）。 ;5、灭活时间：一般采用低浓度、低温和短时间处理为最佳。 6、灭活pH值： 7、微生物含氮量：一般微生物或毒素的总氮量和氨基氮含量越高，灭活剂的消耗量就越大、灭活脱毒越慢。 8、有机物存在：;第二节 佐剂; 佐剂是免疫学和生物制品学中的一个重要内容 ; 什么是 “佐剂”呢？;1. 佐剂（新概念）：凡是可以增强抗原特异性免疫应答的物质均称为佐剂。 佐剂（旧概念）：当一种物质先于抗原或与抗原混合或同时注射于动物体内，能非特异性地改变或增强机体对该抗原的特异性免疫应答,发挥其辅佐作用的物质。 也称免疫佐剂、抗原佐剂。 注意: 佐剂和免疫增强剂的关系?;① 明显增强抗原性微弱的物质诱导机体产生特异性免疫应答。 ② 用最少的抗原和最少的接种次数，产生足够的免疫应答。;二、 研究历史 ;2、1950年代;3、1960年代以后;4、我国的佐剂的研究; WHO认为佐剂除具有免疫增强效应外，尚必须具备下列标准，否则不得用作佐剂。;1、无致癌或辅助致癌性;4、应有一定的吸附力 最好吸附力强;7、不应诱发自身超敏性 也不应与抗体结合形成有害的免疫复合物。;四、免疫佐剂作用机理 ;① 抗原递呈（antigen presentation） ② 抗原寻的（antigen targeting） ③ 免疫调节（immune modulation） ;①抗原递呈： 指抗原分子递呈给T细胞的方法。佐剂与疫苗联合使用，有助于抗原性物质在胞内被加工，被MHC分子特异性的结合、保护、运输并递呈给效应细胞。;② 抗原寻的（antigen targeting） 指抗原传递给免疫系统中适当效应细胞的效率。包括吸引巨噬细胞到达组织部位、活化吞噬细胞、促进抗原与细胞受体的结合等。;③ 免疫调节（immune modulation） 是指任何可以修饰的免疫效应细胞对抗原或表位进行加工的机制。通过这种机制，可以改变特异性免疫应答的本质或强度。T细胞有Th1和Th2两个亚类。同一抗原和不同佐剂一起使用能够引起不同的免疫反应。因此，通过筛选特定的佐剂，可以达到诱导正确的免疫应答的目的。 ;1. 按佐剂物理性质 颗粒型佐剂 非颗粒型佐剂 2. 按佐剂的生物学性质（即Ballanti分类法） 微生物及其组分佐剂