分子杂交与印迹技术.pptVIP

6、非特异性杂交反应： （1）杂交前封闭非特异性杂交位点，减少其对探针的非特异性吸附 （2）常用的封闭物有两类：即非特异性DNA和高分子化合物。如鲑精DNA或小牛胸腺DNA，Denharts溶液或脱脂奶粉 第三十页，共65页 四、应 用 1.检测特定生物有机体之间是否存在亲缘关系； 2.用来揭示核酸片段中某一特定基因的存在与否、拷贝数及表达丰度。 第三十一页，共65页 按待测核酸是否固定在固相支持物上分： 固-液相杂交 印迹杂交 原位杂交 液相杂交 按照杂交分子特性分 DNA-DNA杂交 DNA-RNA杂交 蛋白质杂交 第二节 核酸分子杂交的方法 第三十二页，共65页 一、Southern印迹杂交 此技术由Southern 1975年首先设计。被检测对象为DNA。 第三十三页，共65页 带有DNA片段的凝胶 DNA分子 限制片段 限制性酶切割 琼脂糖电泳 至膜（尼龙膜或硝酸纤维素滤膜）上 转膜 杂交、显影 凝胶 滤膜 用缓冲液转移DNA 吸附有DNA片段的膜 Southern 印迹杂交的技术流程 第三十四页，共65页 （一）待测核酸样品的制备 1、裂解或破碎细胞 2、抽取纯化基因组DNA 3、限制酶消化DNA为大小不同的DNA片段 第三十五页，共65页 （二）待测DNA样品的电泳分离 1、琼脂糖浓度：分离大