医学细胞生物学实验.pptxVIP

医学细胞生物学实验;实验一普通光学显微镜结构使用及细胞形态观察;【实验目的】 了解普通光学显微镜的构造及原理，熟练掌握其操作方法。 掌握光镜下多种细胞的形态和结构特征。;显微镜的构造： 显微镜的种类很多，常用的是复式显微镜，由3个主要部分构成： ①机械部分； ②光学部分； ③照明部分。;;;;;动物各种不同组织的细胞具有不同的形态大小等特征;【实验步骤】 A：显微镜的使用 取用显微镜时，右手握镜臂，左手托镜座，避免倾斜； 接通电源，打开光圈，上升聚光器； 标本片置于载物台上，材料对准通光孔； 低倍下调焦； 选择合适区域推到中央，换高倍镜调焦（细调）； 观察绘图； 结束时将显微镜复原到非工作状态。;显微镜使用的注意点： 禁止单手提拿显微镜和随意拆卸零部件； 低倍下调焦时先上升载物台（或下降镜筒），再缓慢下降载物台或上升镜筒，使物镜镜头与玻片距离由小到大调焦。一般直接转换成高倍镜后细调焦距； 观察标本时两眼同时睁开； 调节合适的光圈和电流强度可使成像更清晰； 如果使用100×油镜，应在标本上滴一滴香柏油，使镜头底端与该介质接触。观察完后及时用二甲苯擦拭油镜头。注意其它镜头不得接触香柏油。;【实验步骤】 B：操作练习： 分别观察肠上皮细胞、骨骼肌细胞、平滑肌细胞、神经细胞和肝细胞等切片，注意比较鉴别细胞的形态结构，核形态数量和位置等特征。 ;;实验报告要求 实验名称： 实验目的： 实验原理： 实验材料： 实验步骤： 实验结果和分析：;实验二 细胞的形态观察;【实验目的】 掌握光镜下多种细胞的形态和结构特征;【实验原理】 动物各种不同组织的细胞具有不同的形态大小等特征;【实验步骤】 分别观察肠上皮细胞、骨骼肌细胞、平滑肌细胞、神经细胞和肝细胞等切片，注意比较鉴别细胞的形态结构，核形态数量和位置等特征。 【作业】 绘图：各种细胞的形态结构;实验二 线粒体的超活染色和细胞显微结构的观察;【实验目的】 了解光镜下细胞器的形态和分布 掌握超活染色法制作光镜标本的基本方法;【实验原理】 活体染色是能使活的细胞或组织着色且无毒害的一种染色方法。可用于研究生活状态下的细胞形态结构和生理或病理变化。 活体染料被特异性地固定和堆积在细胞内某种细胞器上而显色。活体染色分为体内活染和体外活染（超活染色）。 詹纳斯绿B是毒性较小的碱性染料，可专一性地对线粒体进行超活染色。其原理是由于线粒体内细胞色素氧化酶系的作用，使JGB保持氧化状态，呈亮绿色；而周围的细胞质中染料被还原为无色的色基。;【实验步骤】 线粒体的超活染色与观察 （1）在洁净的载玻片中央滴3~4滴中性红-詹姆斯绿B染液。 （2）用消毒牙签牙签刮取自己口腔上皮细胞，刮取时用力应稍重些，以便得到活力较旺盛的细胞，然后将刮取物置于载玻片上染液中混均，盖上盖玻片，染色2~3分钟。 （3）观察：先低倍镜下观察，找到口腔黏膜上皮细胞；再换高倍镜观察，可见细胞质中有散在的、被染成短杆或颗粒状结构—线粒体。;;【作业】 绘图：人口腔上皮细胞（显示线粒体） 小鼠肝细胞（显示线粒体） 兔脊神经节细胞（显示高尔基体） 马蛔虫受精卵细胞（显示中心体）;;实验三 细胞内核酸的定位和细胞计数;【实验目的】 掌握细胞化学技术定位细胞组分的一般方法； 掌握细胞内核酸的分布特点； 掌握活细胞计数的方法。;【实验原理】 A. 细胞化学染色与DNA和RNA的定位 核酸分为DNA和RNA，呈酸性可与碱性染料反应而显色和定位。由于两类核酸分子聚合程度不同，对不同的碱性染料亲和力不同，甲基绿-哌洛宁染料的两种组分分别对DNA和RNA有高亲和力，并分别将二者染成蓝绿色和红色。;【实验原理】 B. 细胞计数 血细胞计数板包括2个计数室，每个计数室有9个大格，每大格的体积为0.1mm3，计数4大格内（4个角）的细胞数，根据每大格的体积和细胞悬液的稀释倍数即可算出细胞密度。;;【实验步骤】 A. DNA和RNA的定位 制备蛙血涂片1张，晾干。 固定：70％乙醇固定5min。 染色：滴1d甲基绿-哌洛宁染液染色5-10min，水冲洗后在纯丙酮中处理2-3s。 观察绘图;【实验步骤】 B. 血细胞计数 1．制备血细胞悬液，处死蟾蜍一只，剪开胸壁、暴露心脏．小心将心脏剪一小口，用吸管吸取心脏血液1 ml，用Ringer液按确定的稀释倍数制成细胞悬液。 2．熟悉血细胞计数板血细胞计数板呈长方形，有2个计数室。每个计数室分为9个大正方格，每个大格边长为1 mm，计数室的底与盖玻片间的距离为0.1mm，即每大格的容积为1mm×1 mm×0.1mm=0.1mm3。四角的每个大格被分为16个中格；中央的大格被分为25个中格，中央的每个中格又被