分子生物学基本技术定稿.pptVIP

第 二 节 聚合酶链反应(PCR) Section 2 Polymerase Chain Reaction 第三十一页，共61页 一、PCR基本原理 ◆ 是在热稳定DNA聚合酶催化下的体外DNA合成的循环反应。 ◆ PCR反应体系：DNA模板、热稳定性DNA聚合酶、引物、四种dNTP和Mg2＋。 ◆ PCR反应三个基本过程： (1) 变性：利用高温(~95℃)使双链解开。 (2) 退火：在低温(25~65℃)下使引物与模板配对。 (3) 延伸：在~72℃利用热稳定DNA聚合酶催化DNA合成。 第三十二页，共61页 模板 DNA 引物 dNTP Taq DNA Pol 变性 退火 延伸 PCR循环 第三十三页，共61页 ◆ PCR反应三个基本过程可以不断循环，从而使体系内DNA的量呈指数增长。 变性 退火 延伸 变性 退火 延伸 循 环 1 循 环 2 经过多轮PCR 第三十四页，共61页 二、PCR反应试剂 1. 模板 (1) 模板DNA用量少，一般使用102~105拷贝 (2) 有一定的纯度要求 (3) 对模板的序列有一定了解 2. 引物 ◆ 引物为一段寡核苷酸序列。 ◆ 每条引物的典型浓度约0.1~0.5μmol/L 第三十五页，共61页 ◆ 引物设计一般原则： (1) 为待扩增序列两端的已知序列