植物细胞组织培养技术实验的的指导书.docxVIP

植物细胞组织培养技术实验的的指导书 植物细胞组织培养技术实验的的指导书 PAGE PAGE / NUMPAGESPAGE13 植物细胞组织培养技术实验的的指导书 PAGE T 植物细胞组织培育技术实验指导书 中国计量学院生命科学学院 二零零六年七月 《植物细胞组织培育》实验指导 目 录 实验一、植物组织培育培育基母液的配制 实验二、植物组织培育的培育基配制 实验三、康乃馨的离体快繁 实验四、胡萝卜愈伤组织的成立 实验五、组织培育物的继代培育 1 实验一 组织培育基母液的配制 一、仪器及药品 冰箱、天平（） 容量瓶:1000ml,500ml、250ml、100ml、25ml 广口储液瓶：500ml、250ml、50ml、25ml 烧杯：1000ml、500ml、250ml、100ml、50ml数十根玻璃搅棒、大药勺、小药勺或挖耳勺 标签纸、胶水、50%酒精、95%酒精、1mol/L盐酸、1mol/LNaOH 几种常用的培育基所需的大批元素、微量元素、有机物、激素、铁盐等 药品 蒸馏水 二、方法和步骤： 依据培育基配方,把大批元素、微量元素、铁盐、有机物、植物激素分类,每一类中各样药品分别称量,如N6培育基各样母液的配制步骤以下： 大批元素母液：包含用量较大的几种化合物〈见N6培育基配方〉，按表中摆列次序,将每种药品的用量扩大10倍，分别称取，分别溶解，而后依据次序混淆在一起。如钙盐等易发生积淀的药品不可以混淆，应单位定容，最后加上蒸馏 水，定容至1升或500毫升。在定容时注意用蒸馏水洗净烧杯和玻璃搅棒以减少 偏差。定容后的溶液为大批元素母液，配制培育基时，每配1L培育基需汲取该母液l00ml或50ml。 微量元素母液：因用量少，为了称量精准和方便 ,常配成 100倍或1000倍的 母液，即每种药品扩大 l00倍或许l000倍。逐一溶解，混淆在一起成为微量元素 母液，每配1LN6培育基需汲取该母液10ml或许1ml。 铁盐：在N6培育基中需要独自配制，它是由硫酸亚铁（FeSO4?7H2O）g 和乙二氨四乙酸二钠（ Na2-EDTA）g，分别溶解，混淆后，用酒精灯加热 2 半小时以上，冷却后定容至 1L。冰箱留宿储藏无结晶析出，不然从头配制。每 配l升N6培育基需加该铁盐母液5ml。 有机物质：主要指氨基酸，维生素类物质。它们多数是扩大1000倍，分别 称量，分别定容和储藏，配制培育基时按需要的量加入。 植物激素：常用的有生长素类如：2,4-D、萘乙酸（NAA）、吲哚乙酸（IAA）、吲哚丁酸（IBA）；细胞分裂素类：激动素（KT）、6-苄基氨基嘌呤（6-BA）、玉米素（ZT）。配制时需要单个称量，依据需要可分别用酸、碱或酒精等不一样 的溶剂溶解后,再用蒸馏水配制成所需的浓度，一般为每ml含mg，配制培育基时按所需要的量分别加入，本实验中的2,4-D和6-BA均配成1mg/ml的母液。 在配制吲哚乙酸（IAA）母液时，先用几滴95%酒精溶解完整后，加蒸馏水定容，不然会发生积淀。而配制6-BA母液时，要用少许的1mol/LNaOH溶解；而配制2,4-D时，可先用少许的95%酒精溶解。 表1 N6朱至清(1975)培育基配方 药品名 配方量(mg/L) 母液倍数 称取量(g/L) (NH4)2SO4 463 KNO3 2830 CaCl2·2H2O 大批元素 166 10× 4·7H2 O 185 MgSO KH2PO4 400 Na2-EDTA 铁盐 100× 4·7H2 O FeSO MnSO4·4H2O 4·7H2 O 微量元素 1000× ZnSO H3BO3 KI 盐酸硫胺素 1 (VB1) 烟酸 有机物质 1000× 3 盐酸吡哆醇 (VB) 6 甘氨酸 各样母液配制好后，要贴好标签，注明母液的名称，配制 1L培育基需要的 汲取量、母液配制的日期，而后放入冰箱中储藏。一般无机物质的母液在冰箱中可保留半年以上，有机物质的母液保留时间在半年之内，但若发现有积淀或霉变,应立刻需从头配制。 三、注意事项 如药品所带结晶水不一样，应进行换算。 因常用的MS培育基中硝酸铵(NH4NO3)属于公安部门严格限制管理的药品，因此本实验采纳N6培育基代替MS培育基。 4 实验二 培育基的配制 一、仪器设施及试剂 电炉 天平（g） 高压灭菌锅 量筒：l0ml、20ml、100ml、500ml 烧杯：1000ml、500ml、250ml 移液管：1ml、2ml、5ml 吸管若干、记号笔 三角瓶或试管、试管架 锡铂纸、玻璃棒 配制好的各样母液，如大批元素母液、微量元素母液、铁盐、有机物、生长调理剂等，个别生长调理剂要随配随用。蒸馏水、pH试纸 蔗糖、琼脂 等 1mol/LNaOH溶液、1mol/LHCl溶液。 二、方法和步骤 1量取所配培育基整体积的